(1)单克隆抗体制备技术是动物细胞融合技术的应用之一,其基础是动物细胞培养.(2)细胞融合是随机的过程,在HAT培养基中培养,目的是筛选得到杂交瘤细胞(去掉未
将纯化过的抗原注射进小鼠等试验动物血液,产生免疫后提取其浆细胞和骨髓瘤细胞融合,培养、稀释、再分开培养直到制得单细胞群后提取分泌产物能和抗原结合的,保留培养物大量繁殖,培养液中即可提取大量单克隆抗体.特点:灵敏度高,专一性强,主要用于诊断、检定,也可用于治疗.
过程1)免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠.免疫的方法取决于所用抗原的性质.免疫方法同一般血清的制备,也可采用脾内直接免疫法.
1.对小鼠注射特定的抗原蛋白,使小鼠产生免疫反应;2.得到相应的B淋巴细胞;3.将小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合,再用特定的选择培养基进行筛选;4.在该培养基上,未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡,只有融合的杂种细胞才能生长(这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖又能产生专一的抗体);5.对上述杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,就可获得足量的能分泌所需抗体的细胞;6.最后,将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养,或注射到小鼠腹腔内增殖,这样,从细胞培养液或小鼠腹水中,就可以提取出大量的单克隆抗体了!
(1)细胞培养技术和细胞融合技术是单克隆抗体技术的基础.(2)图中培养基属于选择培养基,用来筛选杂交瘤细胞.(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比,其最大的优越
1.向生物体内注射抗原,使其发生免疫反应.2.从血液中分离已免疫的效应B细胞.3.培养骨髓瘤细胞.4.把骨髓瘤细胞和效应B淋巴细胞融合,得到杂交瘤细胞.5.筛选并培养杂交瘤细胞,产生单克隆抗体.优点:纯度高,特异性强,在疾病诊断上准确,高效,简易,快速.
(1)动物细胞培养(微生物培养)(2)选择(3)特异性强,灵敏度高(4)灭活的病毒(5)在体外大量增殖分泌特异性抗体(6)骨髓造血干(7)主动运输(主动吸收)
1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程.5、单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培
原理:B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力.B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生
1、抗原制备;2、免疫动物;3、免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备;4、细胞融合;5、杂交瘤细胞的选择培养;6、杂交瘤细胞的筛选;7、杂交瘤细胞的克隆化;8、单克隆抗体的检定;9、分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立;10、单克隆抗体的大量制备.
