iTRAQ实验技术服务
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10:29:34&&有效期至：长期有效
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辉骏生物在液相途径的蛋白质组学方面具有强大的实力和丰富的经验，已为各地科研单位提供数十例iTRAQ技术服务。
一、iTRAQ概述
&&&&&&& iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation，iTRAQ）定量分析蛋白质的基本原理是利用iTRAQ试剂是可与氨基酸末端氨基及赖氨酸侧链氨基连接而标记上肽段,经过色谱分离，一级质谱和二级质谱分析，在质谱图中，被标记的不同样本中的同一肽段表现为相同的质荷比。在串联质谱中，信号离子表现为不同质荷比(114～121)的峰，因此根据波峰的高度及面积，可以鉴定出蛋白质和分析出同一蛋白质不同处理的定量信息。
二、iTRAQ试剂结构
图1：iTRAQ试剂包括三部分：报告部分、肽反应部分、平衡部分。1、报告部分有八种：114-121，因此iTRAQ试剂可同时标记8组样品。2、肽反应部分：能与肽N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接而标记上肽段。3、平衡部分：保证被标记的同一肽段的质荷比相同。
三、与传统双向电泳定量分析相比，iTRAQ具有以下技术优势
&&& 1、灵敏度高，检测限低，可检测出低丰度蛋白；
&&& 2、分离能力强,分析范围广,iTRAQ可以对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白；
&& 3、 高通量：同时对8个样本进行分析，提高了实验通量，可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析；&&
& &4、结果可靠：定性与定量分析结果更加可靠；
&& 5、自动化程度高：液相与质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。
四、iTRAQ技术服务流程
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 图2：iTRAQ技术流程。
五、iTRAQ技术服务内容
&& 1、样本制备与定量；iTRAQ试剂标记；
&& 2、液相分离和质谱分析；数据库检索；
&& 3、蛋白质定量分析；
&& 4、相关生物信息分析；
&& 5、实验报告提交。
六、送样须知
&& 1、技术咨询：在您开始实验之前，本公司将为您竭诚提供最有效的iTRAQ实验设计方案；
&& 2、为了保证iTRAQ实验能顺利进行，样品寄送需满足以下要求：
&&& && &基本要求：iTRAQ试剂可以标记任何类型的样本，如组织、细胞、细菌等材料。因此本公司接受任何类型的样本，对于不同的样本需要的量有所不同，具体需要量请咨询本公司。
&&&&&& 运输要求：液氮或干冰保存寄送，广州本地客户可上门收样。
&&&&&& 注：样本应避免各类污染和反复冻融。
七、iTRAQ实验报告内容
&& 1、蛋白定鉴定和定量分析结果；
&& 2、顾客指定蛋白质对应的质谱峰图；
&& 3、实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
八、iTRAQ实验服务案例
图3：iTRAQ定量分析结果。蛋白质样品经过四种iTRAQ（114-117）试剂标记后，质谱分析，每一质谱峰面积代表同一蛋白质不同处理的表达丰度。
九、服务周期及收费标准：欢迎登陆 /&& 服务热线 400-699-1663
十、服务质量承诺
&& 1、本公司将为您提供严谨的iTRAQ实验设计方案
&& 2、提供客观的iTRAQ实验分析结果。本产品网址：/b2b/fitgene/sell/itemid-6758485.html&|&&|&&|&&|&
定量蛋白质组学iTRAQ技术服务
技术服务信息
生物在线声明：以上所展示的信息由企业自行提供，内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。
供应商联系卡
西农生(北京)生物技术有限公司
北京市海淀区西三旗育新花园2号楼东段三层105室
所在区域：
技术服务详细描述
Thermo&Q Exactive
同位素标记相对和绝对定量iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术可以在一次实验中对2-8个样品中的蛋白质进行标记和同步分析比较，已经成为高通量比较蛋白质组研究的主要手段之一。
&O 可对血浆、体液、动物组织、植物组织、细胞培养液、细菌及真菌等进行体外标记。
&O 标记过程中能保留常见的翻译后修饰位点。
&O 可检测胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白，以及低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
&O 可进行多个时间点、细胞周期、细胞信号传导整个过程蛋白质组动态变化的监测。
&O 可分析详细分期型的临床疾病样本，并可设计样本重复，甚至可以进行个体样本的研究。
&O 通量高，结果直观，系统误差最小。
&O 节省样品的用量和检测的时间。可同时对2-8个样品进行蛋白差异分析。标记完全，标记效率高达97%以上。
&O 分离能力强、分析范围广。质谱具备高灵敏度、检测限低。二级碎片离子信号增强，产生质量更高的二级质谱，确保鉴定结果高的可信度。
&O 定性分析结果可靠，可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息。
&O 自动化程度高。分析时间快，分离效果好。
iTRAQ的8种同位素标记试剂由8种相对分子质量分别为113Da、114Da、115 Da、116 Da、117 Da、118Da、119Da和121Da的报告基团(Reporter group)，相对分子质量分别为192Da、191 Da、190 Da、189 Da、188 Da、187Da、186Da和184Da的平衡基团(Balance group)以及相同的与肽段反应的基团(Peptide reactive group)组成。其中每一种报告基团及与其相应的平衡基团的总分子质量均为305Da。操作时首先对不同蛋白质样品分别进行酶解，对酶解肽段进行不同标记后混合，结合多为色谱分离和串联质谱鉴定，从而实现对不同来源样品蛋白质进行分离、鉴定和定量的目的。
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&O 节省样品的用量和检测的时间。可同时对2-8个样品进行蛋白差异分析。标记完全，标记效率高达97%以上。
&O 分离能力强、分析范围广。质谱具备高灵敏度、检测限低。二级碎片离子信号增强，产生质量更高的二级质谱，确保鉴定结果高的可信度。
&O 定性分析结果可靠，可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息。
&O 自动化程度高。分析时间快，分离效果好。
8个来源不同的相同蛋白样品在一级质谱上表现相同。平衡基团在二级质谱发生中性丢失导致报告基团在二级质谱产生8个报告离子，分别是113Da、114Da、115 Da、116 Da、117 Da、118Da、119Da和121Da。通过分析报告离子的峰强度比值就可以分析同一个蛋白在不同样品间的表达量比值。
为了开发新的临床免疫组化生物标记来区分肝细胞癌（sHCC）和发育异常的结节（DN），采用iTRAQ技术来筛选区分癌前病变和肝细胞癌的免疫组化生物标记。
&O 已发表文献（IF5.12）
iTRAQ-2DLC-ESI-MS/MSBased Identification of a New Set of Immunohistochemical Biomarkers for Classification of Dysplastic Nodules and Small Hepatocellular Carcinoma.&J. Proteome Res. 18&3428
&O 实验设计
样品取自LC，DN和sHCC三个不同的组织来源。提取蛋白后，分别用115，116，117来标记，混合蛋白并经过SCX柱液相分离后，最后进入液质系统进行蛋白质谱鉴定。
共有1951个蛋白被定量，在1.25倍p&0.05的显著差异下得到52个上调蛋白和95个下调蛋白。
挑选出来的候选生物标记进一步通过Western和免疫组化进行验证。进而用ROC曲线和逻辑回归模型来评估生物标记的诊断效果。
最后ACY1和SQSTM1被选为新的生物标记，而所建立的逻辑回归模型包含ACY1，SQSTM1和CD34。这个模型的敏感性和特异性分别是96.1%和96.7%。
部分iTRAQ技术已发表文献
iTRAQ plus 18O: A new technique for target glycoprotein analysis ,&&Talanta, Volume 91, 15 March 2012, Pages 122-127（方法学）
Identification of transaldolaseas a novel serum biomarker for hepatocellular carcinoma metastasis using xenografted mouse modeland clinic samples ,&Cancer Letters 313 (6&（IF 4.8，血清样本）
iTRAQ2DLCESIMS/MS Based Identification of a New Set ofimmunohistochemical Biomarkers forClassification of Dysplastic Nodules and SmallHepatocellular Carcinoma,J. Proteome Res. 18&3428（IF5.12，组织样本）
Analysis of Transcriptional Factors and Regulation Networks in&&&& Patients with Acute Renal Allograft RejectionJournal of Proteome Research 5&181（IF5.12，血清样本）
Changes in proteomics profile during maturation of& marrow-derived& dendritic& cells treated with oxidized& low-density lipoprotein&Proteomics 93&190（IF 4.42，细胞样本）
LC-MS/MS Analysis of Ovarian Cancer Metastasis-Related Proteins Using a Nude Mouse Model: 14-3-3 Zeta as a Candidate BiomarkerJ. Proteome Res., 2010,&& （IF5.12，囊液样本）
蛋白质组生物信息分析：
（可根据项目具体情况做个性化分析）
标准分析A：（包含必选的基础分析模块和基于公共数据库分析的订制模块）
A1.&差异蛋白的综合注释。
A2.&基于注释结果的聚类分析。
A3. 基于Gene&Ontology的差异蛋白的富集分析（生物学途径/细胞学功能/亚细胞定位等）。
A4.&显著激活通路的富集分析及可视化分析。
A5.&gene-phenotype-disease关联分析。
可选分析B：（包含基于专业/商业化数据库系统所提供的出版级数据分析，为高级别杂志所广泛采用的深入型分析）
B1.&差异蛋白的潜在调控模式分析（miRNA/Transcription Factor/Target ）。
B2.&差异蛋白的相互作用网络分析。&
B3.&基于GeneMania/IPA数据库的系统生物学分析，药物处理后表型相关子网络及其调控模块分析。
这部分为我们所推荐的特色分析，供您选择。
我们会根据你的具体需要和研究背景，在分析过程中调整重心，做更有针对性的靶向分析（例如细胞骨架/凋亡/自噬的相关调控模式和新靶点分析）。如果你还有什么具体的需求，请和我们联系。
详见公司网站
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&& &&[供应商：中国协和医科大学中心实验室]
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iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术是由美国应用生物系统公司ABI研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量。
iTRAQ试剂由三部分组成：报告基团、质量平衡基团和肽反应标记试剂基团，形成4种或8种相对分子质量均等量（145或305）的异位标签。
iTRAQ试剂组成图（以4-plex为例）
iTRAQ试剂用于标记酶解后的肽段。在质谱图中，任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一肽段表现为相同的质荷比。在串联质谱中，报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂，质量平衡基团丢失，带不同同位素标签的同一多肽产生不同的报告离子，根据报告离子的信号强度值可获得样品间相同肽段的定量信息，再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。
注释：&样品及实验预判&包括定量、SDS-PAGE测试、酶解和质谱分析，对样品质量及样品之间的平行性进行初步判断。
& & & & & & &Thermo Scientific Q Exactive & & & & & & & &AB Sciex TripleTOFTM&5600
可同时对2-8种不同条件样品进行蛋白质差异分析。
适合广泛样品类型：胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等。
与凝胶分离的蛋白质定量技术相比，iTRAQ质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子，如低丰度蛋白质、强酸（碱）性蛋白质、&10KD或&100KD的蛋白质分子。
疾病标志物筛选 & & & & & & & & & & & & & & &作用机制研究
植物抗逆研究 & & & & & & & & & & & & & & & &&药物作用靶点研究
特殊功能蛋白质筛选
样品要求（/组样品）
蛋白质提取物
浓度&&1&g/&l，蛋白质总量&&300&g
细胞量&107
动物、微生物组织湿重&10mg；植物鲜嫩组织&100mg
血液体积&500&l
上海中科新生命生物科技有限公司（APT）是由中科院上海生命科学研究院控股的从事蛋白质分析测试，蛋白质组学研究服务及产品开发的生物高科技公司。
公司前身为中国科学院上海生化细胞所蛋白质组研究分析中心（RCPA）的服务部。依托中心强大的技术实力，为各科研院所，大学和企事业单位提供最专业的蛋白质组技术服务。从日成立至今，我们已为研究单位完成了300多个二维电泳，DIGE，蛋白质磷酸化位点分析，Decyder MS分析等项目服务，以及超过10000多个蛋白质差异点的质谱鉴定！
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iTRAQ技术是由美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation，ABI)2004年开发的同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)技术，是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行绝对和相对定量研究的方法，这种方法是建立在iTRAQ试剂的基础上。
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