多抗制备(多抗) - 免疫实验 - 生物秀
标题: 多抗制备(多抗)
摘要: [多抗制备(多抗)] 求助，我是新新手，请问高手　如何用兔子制备多抗， 关键词:[多抗]……
求助，我是新新手，请问高手　如何用兔子制备多抗，
回复我想问的是，每次免疫的剂量，能不能每次免疫都用完全弗氏佐剂，请做过的高手抽空回答一下吧，多谢！回复常规免疫方案为抗原加完全福氏佐剂皮下、肌肉多点注射进行基础免疫，再以免疫原加不完全佐剂作2－5次加强免疫，每次间隔2－3周，皮下或肌肉注射加强免疫，也可采取静脉注射。每次免疫后7－14天抽取少量静脉血，分离血清，以备检测免疫效果。完成免疫程序后，取少量血清测试抗体效价达要求时，即可从动物心脏穿刺、或颈静脉、颈动脉放血，待血液凝固后，离心分离血清，加入0.1%叠氮钠作为防腐剂，分装小瓶冻存。 使用的抗原量：如可溶性蛋白抗原，一般首次用0.5-1mg/kg，如不加佐剂，则抗原剂量应加大10－20倍。加强免疫的剂量为首次剂量的1/5-2/5。当然，不同抗原、不同免疫方法、周期所需的抗原量要因情况而异。如需制备高特异的抗血清，可采取低剂量抗原短程免疫法，反之，欲获得高效价的血清，宜采取大剂量抗原长程免疫法。回复是不是后面的加强免疫必须用不完全佐剂，也没有明确的规定。主要是完全佐剂里面含有卡介苗，所以当后面的加强免疫都用完全佐剂的话，可能在注射部位的免疫反应会很强烈，有时会出现皮肤破溃。另外，一定要多点注射，文献上大多指多点为8~10个点。但是我的经验是不可以的，这样容易产生皮肤破溃。回复xuhua 是抄写的《实用免疫学技术》，就我自己的实验来看，光这些是不够的。作为新手，你应该多读些资料吧，先。回复楼主的问题根本不用问高手，随便找个低手、下手都可以解答了。难为 xuhua这么好人，还帮你抄书。回复多谢各位，我老板要我提着有多抗的金兔子才可以毕业 ，我是先诱导表达了一段蛋白，是可溶性的，我查的一些免疫书说是从0.1毫克到1毫克都可以的，我已经免疫了3只兔子，每只用了0.3毫克，加上佐剂共1毫升，是在兔子背上打的皮内注射，共打了40个点。各位高手，是否会出不来抗体。因为考虑剂量有点少，所以前天又打了一只兔子，用的是1毫克，加佐剂共2毫升，用的是皮内注射同时肌肉注射，不过问题是昨天这只兔子不知何故已经归西，我已经又订了4只兔子，准备下周一打。当然不是我自己想要拼命的残害兔宝宝们，是老板要我打6只，说是为了保险。顺便说一句老板财大气粗。非常感谢高手们。回复我已经免疫的兔子有无补救的方法，比如加强免疫的时候，剂量一直用0。3毫克，或是一直用完全佐剂？回复第一次免疫用完全佐剂，以后都用不完全佐剂，如果免疫效果不好，可以多免疫几次。回复问楼上一个比较菜的问题：为了要检测血清中的IgG、IgM，制备血清时，全血要抗凝还是不需抗凝后，多少转、多少时间离心？什么情况保存制备好的血清？回复问楼上一个比较菜的问题：为了要检测血清中的IgG、IgM，制备血清时，全血要抗凝还是不需抗凝后，多少转、多少时间离心？什么情况保存制备好的血清？回复不需要抗凝,装血的容器最好用玻璃的,把采好的血放37度半小时,后放4度冰箱过夜,这时可以直接吸出血清,后用适当的器材把血块划开,再过夜把剩下的血块等以3000转离心半小时.回复非常感谢szq922990 的回复！回复我的做法:第一次免疫采用双侧腘淋巴结+双侧后足足掌皮下注射免疫,加完全佐剂;加强时皮下多点注射,20-40点(每点50ul,视注射体积决定点多少),加不完全佐剂.第一次免疫前需提前一周诱导动物,第一次免疫二周后即可加强.回复免疫效果还与你的抗原有关哟回复非常感谢各位的帮忙，我用琼脂双扩散方法已经测出我免疫的兔子产生了抗体，效价为1：32，想请问是否可以取血收集血清了，收集的血清是否要56度灭活内毒素，另外做多抗纯化是否可用盒，什么公司的好回复我正在做兔的高免血清,对于兔的免疫,我认为想得到好的免疫效果,1,2次免疫是不够的,用佐剂来讲,完全和不完全弗多佐剂差不多,而且你分点分的可太多了,40点,我每次只分4点.对有佐剂的疫苗(vaccine)就用皮下或肌肉注射.我还有一个建议,你的蛋白不太多的话,可以考虑将纯化蛋白直接从耳缘静脉注入体内,而且建立每隔3-4天重复一次,直到血清的滴度达到你的要求.这个办法比加佐剂的方法血清抗体产生的快点,而且滴度高一点,你可以试试.回复现在公司做多抗的很多，你可以考虑直接委托公司来做，我有个项目交给恩必美(abmaking)做的，1500元给了我40ml兔，效价到1：5万，你可以留意一下
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求助关于制备多克隆抗体小鼠选择问题
近期准备制备多克隆抗体,准备买Balb/c小鼠,但不知是选择雌鼠好还是雄鼠更合适,请有经验的战友指点,谢谢!制备多抗不需要用Balb/c，太浪费了，用普通鼠就可以了，一般选用雌鼠，雄鼠会自相残杀；还有人说雌鼠的免疫应答能力要比雄鼠强一些。waynepionnet wrote:制备多抗不需要用Balb/c，太浪费了，用普通鼠就可以了，一般选用雌鼠，雄鼠会自相残杀；还有人说雌鼠的免疫应答能力要比雄鼠强一些。 谢谢主任解答,我是看了下面这个帖子才决定用Balb/c鼠的,因为前面实验花了很长时间现在时间紧啊怕万一弄不好就太耽搁时间了>千万不要贪图便宜，一个昆明鼠一方面不容易长腹水，即使长了到后期有自消的趋势，到那时痛苦死你！ ============他好像没有看清楚问题吧?是制备多抗,不是制备单抗腹水!做多抗用昆明鼠没有问题的,放心吧!waynepionnet wrote:千万不要贪图便宜，一个昆明鼠一方面不容易长腹水，即使长了到后期有自消的趋势，到那时痛苦死你！ ============他好像没有看清楚问题吧?是制备多抗,不是制备单抗腹水!做多抗用昆明鼠没有问题的,放心吧!好的,还有请问主任用昆明鼠来制备多抗一般需要多少只老鼠比较合适?因为初次做这样的实验没有经验宁肯多弄些也怕少了到时麻烦.还有怎样取老鼠血能量大些?我们实验室有人前段时间取老鼠血费了老大劲了也弄不到几滴血,请再次指教!制备多抗需要多少只小鼠? 也的依据实验啊!一只小鼠能采到500 UL血, 如果采的好的话会更多,反之少.我们是眼球采血,是不是有点残忍.呵呵 你的实验需要多抗血清,少的话,就养3~4只,需要多的话就养6只,在养小鼠这段时间里,还需要照顾好他们呵呵!我也在找相关资料,我还想问一下,那么关于鼠龄和体重要注意吗?制备多抗，为什么不用rabbit?真不好意思,好久没有来了.制备多抗的动物可以用兔子,养小鼠方便.yangxiei80118 我也在找相关资料,我还想问一下,那么关于鼠龄和体重要注意吗? 园子里有这样的帖子,老鼠6-8周龄或体重18克也可以,有的人用20克.小鼠一般6周发育成熟，BALB/c小鼠体型较小一点，这个品系做实验比较稳定。一般摘眼球取血可得1ml左右的全血，普遍的操作者采血量为750ul。建议制备多抗养6只以上小鼠。保险
您的位置： &&你有哪些回购过五次或五次以上的护肤品？ - 知乎71398被浏览9509215分享邀请回答/shop/view_shop.htm?spm=a1z09.1.a1zvx.d53.Wbt0ja&mytmenu=mdianpu&user_number_id=)买过几次，服务炒鸡好而且东西都很放心 。顺便大家一个小tip 那就是别买那些销量过高的太多皇冠的店铺，找代购就找那些细水长流的代购店铺，绝对不会有假～宝宝们不要光收藏不点赞啊啊啊 哭瞎在厕所4.9K645 条评论分享收藏感谢收起1.2K91 条评论分享收藏感谢收起查看更多回答27 个回答被折叠（）CGMMV病毒提纯及多抗制备_百度文库
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CGMMV病毒提纯及多抗制备
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单抗与多抗的区别是什么
摘要：本文主要介绍了单克隆抗体与多克隆抗体的定义，并介绍单抗、多抗在制备流程、特点及应用上的区别。
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单抗与多抗的定义
抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构叫做抗原决定簇，也称为抗原表位。一个抗原可以有许多不同的抗原决定簇，因此，机体也可以产生多种不同的抗体。由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体（单抗）。而由多个B淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体（多抗）。从某种角度而言，多抗是多种单抗的混合物。
单抗和多抗制备上的区别
经过特定抗原处理过的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的方法得到杂交瘤细胞，经HAT培养基筛选、ELISA检测效价后就得到阳性克隆株，最后进行细胞培养或将细胞注入到动物（一般为balb/c小鼠）腹腔中用腹水培养，收集上清/腹水纯化后就能得到单克隆抗体。而制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐，只需将抗原（纯度越高越好）直接注入到动物体内进行免疫，经过3~4次免疫，ELISA测其效价合格后，收集血液离心得到上清，纯化后即能得到多克隆抗体。因此多抗制备周期比单抗的短，多抗首次制备价格也比单抗要低。
单抗多抗应用上的区别
单抗和多抗都有各自鲜明的特点与优势。单克隆抗体的特异性高，一旦制备成功就可以永续的生产完全一致的单克隆抗体，因此可以对其特异性进行全面、系统地验证。但如果所识别的抗原表位被破坏，实验的结果将会受到很大的影响，这也是单抗的缺点之一。而多克隆抗体的特异性较差，即使是使用相同的抗原制备多抗，不同批次间也会存在差异，因而在特异性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫检测时，更容易造成背景，例如在WB中有杂带，在IHC中背景较深等等。虽然还存在着交叉反应*的问题，但由于多抗识别多个抗原表位，即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变，实验的结果也不会受到影响。在相同条件下，使用多抗可以提高检测的灵敏度，对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。
如果对抗体的特异性要求高，用量较大或需要长期使用一致的抗体，制备的抗体应用要求多（WB/IP/IF/ICC等)，可以选择。若对抗体的特异性要求不高，需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做ELISA检测，可以选择。
单克隆抗体与多克隆抗体的对比表格
多克隆抗体
单克隆抗体
对免疫原的要求
免疫原纯度越高越好
不纯的免疫原也能得到高纯度的抗体
高（抗原亲和纯化）
相对较差，对理化条件敏感
较难，不同批次的抗体质量差异大
易于标准化，批次间差异小
只有一个抗原表位
很常见，难避免非特异反应
不常见，可避免非特异反应
大多数没有
大多数没有
* 交叉反应：从理论上说，用小鼠抗原制备的抗体应只能用于小鼠，但是由于动物种属之间，特别是相近的动物之间存在着同源性（如大鼠与小鼠），这样会导致抗体发生交叉反应，即用一种动物抗原制备的抗体也可与其它一些物种的抗原反应。
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