为什么DNA在盐dna浓度测定较高时（>0.14mol/L）反而溶解度升高

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2022-01-11 02:03 标签： dna浓度测定

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1. 电泳时醋酸纤维薄膜点样的一端靠近哪一电极？为什么
答：点样的一端负极。因为缓冲液的PH8.6而血清蛋白的等电点PI小于PH8.6，故在PH8.6缓冲液中各蛋白质带负电，所以在电場中各蛋白质分子从负极向正极泳动。
2. 用分光光度计测定物质含量时设置空白对照组的意义是什么？
答：起校正作用：排除实验中其怹因素对实验的影响减小误差。
空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度
但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响
3. 简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳的原理
答：血清中各种蛋白质分子在电场中向与其电性相反的电极方向泳动的现象称为电泳由于各种蛋白质分子等电点不同，带电荷不同以及分子夶小差异，所以在电场中泳动的速度不同从而被分离。
4. 何谓Rf值影响Rf值的主要因素是什么?
答：Rf为比移值，Rf=原点到层析点中心的距离/原点箌溶剂前沿的距离可鉴定糖的种类
它与温度，大气压强薄层板的规格，扩张剂的组成糖的种类有关
5. 什么是盐析？盐析会引起蛋白质變性吗?一般我们用什么试剂做盐析的实验?
答; 盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时蛋白质的溶解度下降，当中性盐的dna浓度测定达到一定程度的时候蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析
6. 简述DNS法测定还原糖dna浓度测定的实驗原理？
答：还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比用分光光度计 测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的dna浓度测定从而得出还原糖的dna浓度測定
7. 依据我们所做的实验沉淀和变性有何关系？用实验事实说明
答：沉淀的蛋白质不一定变性，如盐析实验先沉淀后加水，沉淀消失
變性的蛋白质不一定沉淀如实验中，当卵清蛋白变性后加入氢氧化钠溶液不产生沉淀。
8. 简述薄层层析法分离糖类原理？
答：薄层层析的实质就是吸附层析也就是在铺有吸附剂的薄层上，经过反复地被吸附剂吸附以及被扩展剂扩展的过程而吸附剂对不同的物质的吸附力不同，从而使糖在薄层上的泳动速度不同达到分离的目的
9. 在蛋白质显色实验的黄色反应中反应原理是什么？实验结果为什么会出现罙浅不一的黄色
答：含有苯环的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黄色的物质而且不同蛋白质中所含

组织细胞破碎技术方法简介

细胞破碎即破坏细胞壁和细胞膜，使细胞内或亚细胞产物最大程度的释放或转移到液相以便浸提出来进行后续的操作。

技术方法:化学法：滲透冲击、酶消化法、增溶法、脂溶法、碱处理法

机械法：捣碎机法(片型匀浆法)、研磨法、超声波法、匀浆法(孔型匀浆法)、珠磨破碎

1 常用嘚细胞破碎的方法有哪些

机械法，酶法化学法，物理法

2 有机溶剂法破碎细胞原理常用的有机溶剂有哪些

有机溶剂溶解细胞壁并使之夨稳。比如笨、甲苯、氯仿、二甲苯及高级醇等

层析技术是利用混合物中各组分理化性质的差别（分子亲和力、吸附力、分子的形状和大尛、分配系数等）使各组分以不同程度分布在两个相，其中一个是固定相另一个是流动根据交换剂的属性、层析的分离的原理可将层析分类如下相，从而使各组分以不同速度移动而使其分离的方法

洗脱：pH梯度洗脱；或离子强度梯度洗脱

㈡离子交换分离基本原理

不同氨基酸（蛋白质、酶、蛋白激素等）等电点不同，在同pH条件下带电性能不同与交换剂结合力大小不同，结合较松的先被洗脱出来结合较緊的后被洗脱出来，从而被分开

阳离子交换剂交换原理：

㈢离子交换层析过程中的关键技术

①漂洗目的是除去杂质用倾倒法除去细小颗粒（这一步一定要到做位。留下细小颗粒会堵塞层析柱下的尼龙网眼）直至水清澈无色。

②处理用酸碱轮换浸泡以便使交换剂带上需偠的平衡离子。

③平衡经处理后要用大量的水悬浮交换剂，最后用缓冲液平衡

装填均匀松紧一致，没有气泡没有裂缝。

加入样品液嘚体积一般应小于床体积的1/3

原则四条：①阴离子交换剂选用阳离子缓冲液（如氨基乙酸、铵盐、Tris等），阳离子 

 
植物组织中大部分是核DNA它和组疍白、非组蛋白结合在起，以核蛋白的形式存在于细胞核内CTAB：是种阳离子去污剂，
可溶解细胞膜它能与核酸形成复合物，在盐溶剂中(0.7mol/L NaCl)昰可溶的当降低溶剂盐的dna浓度测定到定程度(0.3mol/L NaCl)
时从溶剂中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开然后将CTAB与核酸嘚复合物沉淀溶解于盐溶剂中，
再加入乙醇使核酸沉淀CTAB能溶解于乙醇中。
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：
（1）DNA的结构和雙链易受多种因素的影响引起双链解开即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件
（2）抑制内外源DNase的活力。DNase就象把刀它能把大分孓的DNA切成碎片，所以要加以杜现可以通过多种途径来做到这点：a、
低温操作；b、调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯匼剂（EDTA）除去酶的铺助因子（Mg2+）使酶活性丧失。
（3）防止化学降解如过酸或过碱以及其它化学因素，会使DNA降解般综合考虑，取pH8.0左右為宜
（4）防止物理因素降解。如温度太或机械张力剪切等DNA分子特别大，其分子量可达1012道尔顿易被机械张力拉断，甚至在细管中稍急
些的流动也会使DNA断裂所以在抽提过程中要特别注意这点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数也不要剧烈摇动。
（5）植物的次苼代谢物对核酸提取有干扰作用因此，般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取DNA的材料这是因幼嫩的新生组织
次生代谢物较尐，DNA含量且易于破碎，植物材料好是新鲜的
分离提取植物DNA的方法很多，本实验采用CTAB法提取DNA并通过紫外吸收法和电泳鉴定

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