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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-12-21 20:39 标签： 细胞株与细胞系
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细胞株细胞系
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哪位大神知道哪家公司做Cas9基因敲除的细胞系可靠可信一些
网上公司各种信息，各种广告，哪位大神知道哪家公司做Cas9基因敲除的细胞系可靠可信一些？？？
请问你们公司做细胞系的基因敲除价格大概多少呢？周期多长呢？
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CRISPR做细胞系敲入哪家公司做的比较好？
最近老板心血来潮想用CRISPR做细胞系敲入，实验室基础太差所以决定一方面自己摸索，一方面找公司做，求稳。
联系了几家公司，结果都是不包KI结果，只对已经完成的部分负责，项目有可能因为做不下去而中止。
其中一家公司的产品经理更是直接说“现在国内就没有包结果的细胞系KI”……
想问一下大家有没有找公司做过基于CRISPR的细胞系KI？如果有的话，哪家比较靠谱？
或者国内有哪家实验室做的比较在行？
我们实验室主要是做胸部恶性肿瘤的，所以用的食管癌的KYSE系列的细胞系。
主要做的最近发现的几个比较火的位点，FBXW2、FAT、AJUBA之类的。
想请问report line是什么？
报告基因，你们选择什么作为报告基因，GFP适不适合？肿瘤细胞系没坐过，不知道好不好做，一般来说能稳定扩增，能形成克隆，用药筛方式是很好做的，干细胞里面做基本不是问题，你的这个细胞系可能公司没接触，不了解所以有点麻烦。在iPSC里面一般先转染，然后药筛。接着铺单克隆，单克隆长到一定细胞量后划出一部分鉴定，阳性克隆保留。你要做这个细胞系，转染不成问题，iPSC算是最难转染层级的细胞了，一般lonza核转仪电转。富集过程应该也不是问题，一般是在整合片段里面加一个药筛表达子，比如用housekeeping gene 的启动子PGK（糖酵解中的酶的启动子，甘油磷酸激酶）驱动的puromycin 。后面的就不知道你们细胞系该怎么继续了，
多谢大神指点！
我初步的想法也跟你差不多，转染后药物筛选，活着的细胞形成单克隆，然后鉴定有没有成功进行基因组编辑。
实验的原理我也看过一部分文献，奈何实验室实在是没有CRISPR的基础……很多参数、条件，我们其实跟公司一样，也要现摸索。
你们是自己实验室在做？还是有过合作的公司？
公司做hipsc的，平台还算成熟，可以交流。如果没时间可以给你联系方式。如果只是crispr，可以直接私聊我，我可以给一些我们公司经验
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