“武汉中博”推荐阅读【养猪一点通】：新生仔猪玉米赤霉烯酮中毒的处理
对临床发现的由母猪采食玉米赤霉烯酮含量超标饲料引起仔猪中毒的病例进行了检测分析，并根据检测结果出具了针对性处理建议，为临床此类案例的处理提供借鉴。
新生仔猪；玉米赤霉烯酮；阴户红肿
玉米赤霉烯酮（ZEA）是由镰刀菌分泌产生的一种具有强雌激素样作用的真菌毒素，该毒素在玉米和小麦等原粮中广泛存在，其毒性作用的主要靶器官是生殖系统。2016年10月山东某猪场产房仔猪集中性出现出生后阴户红肿、八字腿和产房腹泻等症状，给猪场造成了很大损失，通过对发病前后的调查和实验室检测，确定是由ZEA中毒导致。
1 发病情况
该猪场存栏母猪700头多头，母猪用自配料、仔猪用全价料，2016年9月中旬外购一批玉米，购入5 d后开始使用，使用约8 d后产房仔猪开始腹泻，发病日龄集中在产后7 d左右，粪便呈灰色、黏稠样，发病率约60%，病死率很低；腹泻出现4 d后，产房新生仔猪中的小母猪普遍出现程度不等的阴户红肿（图1），发病率约占90%，没有死亡；还有约20%新生仔猪出现八字腿样神经症状（图2），死亡率超过80%。库存玉米有明显的霉变粒、碎粒，约占20%。
根据临床症状与病史调查，初步怀疑发病是由ZEA中毒造成，为了确诊，取发病猪3头、玉米、母猪自配料和肥猪全价料送实验室进行病原检测和霉菌毒素检测。
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
病料组织：分别采取3头病猪的肺脏、淋巴结、脾脏、肝脏和脑。
饲料：玉米（1号）、母猪自配料（2号）和肥猪全价料（3号）各500 g。
检测试剂：PCR及RT-PCR试剂均购自Takara 公司，黄曲霉毒素B1（AFB1） ELISA检测试剂盒和ZEA ELISA检测试剂盒均购自南京柏发生物公司。
仪器：DYF-400A摇摆式高速粉碎机、SCQ-5201B超声波提取仪、Thermo MuLtiskan FC型酶标仪、Eppendorf PCR仪、GE凝胶成像系统。
2.1.2 方法
PRRSV和PCV的检测：分别将3头猪的各组织病料剪取1 g 左右，加生理盐水3 mL 研磨，4 ℃下 5 000 r/min 离心10 min；取上清 300 μL加入 600 μL TRIZOL，反复吹打裂解细胞，静置5 min，加氯仿200 μL，盖紧管盖剧振15 s，静置 2 min，4 ℃下 12 000 r/min离心10 min；取上清400 μL，加入800 μL冰冻的异丙醇，轻轻混匀，-20 ℃静置 15 min，4 ℃下12 000 r/min 离心10 min；弃上清，用1 mL75%DEPC（焦碳酸二乙酯）处理的冰乙醇洗涤、瞬离，吸尽管底液体，晾干；加入20 μL DEPC水溶解管底及管壁RNA。从3头猪各混合组织病料中所得RNA提取物按张燕霞和蒋成砚等人的方法分别检测PRRSV和PCV。
PRV的检测：分别将3头猪的各组织病料剪取1 g左右，加生理盐水5 mL 研磨，4 ℃下12 000 r/min 离心2 min；取上清液250 μL加入750μL DNAZOL混匀后室温放置3 min，4 ℃下12 000 r/min 离心10 min；取800 μL上清，加入500 μL的70%DNAZOL+30%乙醇溶液，混匀后室温放置5 min，4 ℃下7 500 r/min离心5 min，弃上清，加入1 mL75%的乙醇，轻轻振荡后4 ℃下12 000 r/min离心2 min，弃上清，晾干；加入40μL 8 mM的NaOH 溶解。从3头猪各混合组织病料中所得DNA提取物按李艳等人的方法检测PRV。
AFB1的检测：分别取9种样品各500 g粉碎后、过20目筛，秤取每种各5 g样品分别放于9个100 mL具塞三角瓶，向其中加入25 mL甲醇水溶液（1:1），振荡15min、过滤，弃去1/4初滤液后收集滤液作为样品提取液，用样品稀释液将样品提取液稀释后制成待测液，取待测液50 μL加入微孔中进行ELISA测定，在450 nm处测定各孔的吸光度，按说明书中的方法计算各样品中AFB1的含量。
ZEA的检测：从上述粉碎样品中秤取每种各5 g样品分别放于9个150 mL具塞三角瓶，向其中加入25 mL甲醇水溶液（6:4），用超声波提取10 min，静置5 min，用定量滤纸快速过滤、收集滤液。取5 mL滤液用样品稀释液做10倍稀释制成待测液，取待测液50 μL加入微孔中进行ELISA测定，在450 nm处测定各孔的吸光度，按说明书中的方法计算各样品中ZEA的含量。
病原检测，用PCR未检测到任何病原，PRRSV、PCV和PRV均呈阴性。霉菌毒素检测，3种饲料中AFB1的含量均低于国家标准，玉米和自配料中玉米ZEA的含量极显著高于国家标准、全价料中ZEA的含量低于国家标准（见表1）。
3 处理与分析
根据上述检测结果，结合猪场发病情况，确认本次发病是由于母猪采食了用ZEA含量明显超标玉米配制的饲料，且时间较长造成，即病因是ZEA中毒。建议猪场采取如下措施：1）立即停止使用此次采购剩余的玉米及自配料，换用品质好的玉米并对玉米进行过筛处理，或换用母猪全价料；2）饲料中加入含酵母细胞壁和改性蒙脱石的脱霉剂2 kg/t，使用一个月；3）饮水中加入葡萄糖10 kg/t，供母猪和产房仔猪饮用，使用15 d；4）有神经症状的仔猪按淘汰处理。
霉菌毒素是霉菌在生长繁殖过程中分泌产生的一种代谢产物。自然界中霉菌分布极其广泛，土壤、空气、水体等几乎任何地方在条件合适的情况下都会有霉菌生长，养殖业中使用的饲料及其原料如玉米、麸皮等非常容易受到霉菌污染。这些原料及制成的饲料被霉菌污染后，如果没有及时采取有效处理措施，动物采食后就会对其造成影响。
霉菌毒素对动物的危害从毒素方面考虑，呈现明显的“种属性”、“量效性”和“累积性”，三者之间相互关联。除一些普遍性症状，如免疫抑制、繁殖性能下降和增重缓慢外，不同种属霉菌分泌的毒素所造成的临床危害也有差异，目前临床常见的霉菌毒素主要有黄曲霉毒素（AF）、赭曲霉毒素（OTA）、伏马毒素（FB）、呕吐毒素（DON）和ZEA，危害的靶器官分别主要为肝脏、肾脏、肺脏、消化系统和生殖系统，临床多表现肝脏肿大、石灰尿、肺水肿、呕吐等。本病例中初生仔猪的阴户红肿是由ZEA中毒引起，该毒素具有类雌激素的作用，被猪摄入后会引起以生殖系统为主的一系列病变，母猪表现为外观可见的阴户红肿、乳房肿胀等类似母猪发情时的症状，公猪会由于睾丸间质细胞的机能和结构受到损伤而主要表现为睾丸萎缩、精子质量下降和性欲降低等。怀孕母猪饲料中ZEA含量超标后严重的可引起流产、死胎，常见的多为初生仔猪阴户红肿，如果哺乳母猪日粮中存在ZEA的过量则会通过乳汁继续传给仔猪引起症状的加剧。
动物中毒的严重程度与饲料中含有的霉菌毒素量和与霉菌毒素的接触时间长短直接相关。通常急性中毒多导致动物的直接死亡，AFB1在143.1 μg/kg时，就会导致犬的发病死亡；慢性中毒的临床表现会随霉变饲料摄入时间的长短而有所不同，摄入时间越长，毒素在体内的积累就越多，对动物造成的损害也就越严重。临床上常见的霉菌毒素中毒多是慢性中毒，这是由于目前养殖户对霉菌毒素造成的危害有了普遍性认识，对饲料原料会进行筛选和前期处理，使得饲料中霉菌毒素含量显著下降。本案例中，猪场在接收玉米时也进行了前期处理，但由于机器故障故只处理了一小部分，加之长时间储存造成了霉菌毒素含量的增加，母猪在一段时间内对这些饲料的摄入引起体内ZEA的积聚，并通过奶水或胎盘传给了吃奶的仔猪及胎儿，造成仔猪ZEA中毒。
发生霉菌毒素中毒后的首要措施是停止霉菌毒素超标饲料的摄入，并在饲料中加入具有抑制霉菌生长和吸附霉菌毒素功能霉菌毒素综合控制性添加剂，其次要采取解毒措施，并注意保护肝脏功能，使中毒症状尽快消除。目前研究在日粮中同时添加酵母细胞壁和改性蒙脱石可明显提高对玉米赤霉烯酮及黄曲霉毒素的吸附效果，因此吸附性脱霉剂最好选择同时含有两种成分的产品。针对已经出现的中毒症状，要通过加快肝脏代谢，增强肝脏功能来消除中毒症状。
本文选自《猪业科学》2017年第6期“养猪一点通”栏目：P138-139（版权归《猪业科学》所有，如转载，请注明出处）。
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1 猪链球菌病与副猪嗜血杆菌病的鉴别诊断
1.1 发病症状的区分
1.1.1 副猪嗜血杆菌病(HPS)
发病迅速，感染病原后几天内就发病。出现体温高、反应迟钝，运动时或迫起时发出尖叫疼痛(见图1)，某些猪由于发生脑膜炎而表现肌肉震颤、麻痹、惊厥。病猪四肢关节肿大，跛行，颤抖，共济失调，可视黏膜发绀，眼睛灰色或褐色，个别有眼球突出，而后渐行性消瘦(见图2)，最后死亡，从发病到死亡时间较长。
1.1.2 猪链球菌病(SS)
主要表现为多发性关节炎，患猪体温升高，被毛粗乱，食欲不佳，逐渐消瘦。病猪眼睛潮红，脑膜炎型时猪眼球会斜向一方(见图3)。
1.2 关节部位症状区分
1.2.1 副猪嗜血杆菌病
引起的关节炎、跗(见图4)，腕关节肿大、剧痛、瘸腿，用手一捏，疼得尖叫；剖检关节腔内有浆液性纤维蛋白渗出物(图5)，关节腔润滑液增多，积液为清亮或微黄(图6)，关节肿大一般是对称性的，而链球菌则不一定。
1.2.2 猪链球菌病
关节型链球菌腕关节发病居多(图7)，关节腔积液是化脓型，比较浓稠，色泽深。关节肿大，初期坚硬、温度升高，后期变软，触之有波动感，针刺流脓，有时伤口破溃后脓汁会自动流出；少数变硬、皮肤增厚；剖检滑液浑浊，有黄白色奶酪样块状物，关节周围皮下胶样水肿，有化脓性坏死灶，严重者关节软骨坏死。
1.3 心脏变化区分
1.3.1 副猪嗜血杆菌病
副猪嗜血杆菌形成“绒毛心”，这是因为副猪嗜血杆菌以渗出为主，是心包炎，心肌表面形成绒毛，心包与心肌之间是淡黄色渗出液、不粘连。
1.3.2 猪链球菌病
链球菌会形成“铠甲心”，是心肌炎，心肌渗出为主，所以心包与心肌粘连。
1.4 渗出液区分
1.4.1 副猪嗜血杆菌病
腹腔有明显的纤维素性渗出，常出现腹腔脏器与腹膜粘连，严重的剖开腹腔后看不见腹腔脏器，整个腹腔胜器被黄白色纤维素性伪膜包裹(见图9、图10)，并且腹水严重，伴发怪臭味。
1.4.2 猪链球菌病
也出现腹膜炎，但纤维素性渗出较少，主要以出血性炎症为主，并且没有太多的腹水。
1.5 用抗生素治疗辨别
链球菌感染用一般抗生素就能看到效果；副猪嗜血杆菌效果则不明显。
1.6 死亡后表现
副猪嗜血杆菌病死后猪体表不变色。链球菌病猪死后体表紫红色，尤其腹下颜色更深。
2 笔者对防治措施制定与落实的几点建议
在当前中国大部分猪群处于免疫抑制状态的大背景下，猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病的危害可以说已达到了登峰造极的境界，如果不先从调理机体免疫系统，解除免疫抑制的大前提下着手，很可能会出现反复发病、持续感染的恶性循环。
1)本着解除免疫抑制(添加免疫营养)、抗病毒(板蓝根)、抗细菌(首选延胡索酸泰妙菌素+氟苯尼考)、抗应激(添加第三代抗应激药物)协同作战；
2)伤口(主动或被动造成)消毒与保健(首选头孢噻呋钠)和对出现应激因素(比如调栏、断奶转群)的现象，一定要根据本场实际情况，科学合理制定SOP(标准化操作)。
3)大环境的消毒要同时推进，建议选用含有主要成分为戊二醛的消毒液。
4)建议方案执行关键点：下面所列举的方案全部是拌料添加量，饮水添加量一律减半。I拌料和饮水同时进行，要严格按照7d、5d、7d的脉冲式给药方式进行添加；II建议治疗方案：延胡索酸泰妙菌素+氟苯康+免疫营养+第三代抗应激产品(注：延胡索酸泰妙菌素的使用量，按原粉计算：拌料不能低于300 g/t；饮水减半，使用150 g/t)。
笔者只提出一点：抗生素适时保健与免疫营养的合理应用，同时结合第三代抗应激药物将会对猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病现状起到“扭转乾坤”的大的裨益。
本文选自《猪业科学》2017年第8期“养猪一点通”栏目：P138-139（版权归《猪业科学》所有，如转载，请注明出处）。
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