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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-11-08 02:46 标签： 细胞培养 外包
所有问题分类中洪博元实验外包--猪甲状腺细胞培养实验
实验方法原理
由于甲状腺富含纤维性组织，所以甲状腺的消化分离一般采用胶原酶与胰蛋白酶联合消化法，用单一的胰蛋白酶消化效果一般；促甲状腺激素(TSH)是培养甲状腺细胞必备的，它能够起到促进甲状腺细胞生长的作用。
试剂、试剂盒
仪器、耗材
一、实验步骤
1. 杀猪后迅速取出甲状腺 1～2 个，置于盛有
75%酒精的烧杯中，用冰盒送至实验室(1 h 以内)。
2. 立即置于pH为7.4
的PBS缓冲液(含青链霉素)中，反复漂洗，直至漂洗液清澈透明。
去除包膜及结缔组织，用眼科剪子、镊子将甲状腺组织剪成1mm3&大小的碎块。
4. 置含0.25%胰酶和300 U/ml 胶原酶的容器中，放于
37℃温箱中消化60 min，每隔15min 需摇动一次。
用吸管将上清液的三分之二吸入离心管中，并加入含有胎牛血清的培养基终止消化。
6. 以1000 &rpm
离心10分钟后，弃上清。
7. 将细胞沉淀用F-12
培养基制成细胞悬液，充分吹打并用不锈钢网(200目)过滤，再以1000 rpm 离心10分钟，弃上清。
8. 沉淀悬于含15% 胎牛血清和1 U/L牛 TSH的F-12
培养基中，台盼蓝染色证明活细胞数大于95%，调整细胞浓度接种于培养板中(1 ml/孔)。
9. 置于 37℃的5%
CO2&孵箱中，每 2-3 天换液一次，至细胞融合成片后用于实验。
猪甲状腺细胞培养 24 小时，镜下细胞贴壁，呈聚集生长，细胞呈圆形或椭圆形，如下图。
& & 图 1 &培养 24
小时后的猪甲状腺细胞
胰蛋白酶适于消化细胞间质较少的软组织如上皮组织、肝、肾等，对传代细胞也非常好。
但消化纤维性组织或较硬的癌组织则效果较差。胶原酶对胶原有很强的消化作用，适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等。
由于甲状腺富含纤维性组织，所以甲状腺的消化分离一般采用胶原酶与胰蛋白酶联合消化法，用单一的胰蛋白酶消化效果一般；促甲状腺激素(TSH)是培养甲状腺细胞必备的，它能够起到促进甲状腺细胞生长的作用。
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