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小刺猴头菌化学分研究及菌种鉴定.pdf文档全文免费阅读、在线看 115页
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小刺猴头菌化学分研究及菌种鉴定
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兰塑堕型生望型览兰堂燮——．一
壅墨堕些堂堕坌堑壅墨璧跫塑垄
本论文对小京lj猴头菌的化学成分及菌种签定方法进行了比较系统的研突。，』、
刺猴头菌[Hericium
caput-medusae(Bul
中蛉一令耱，是长是出垂然保护区黪有戆蘩物资源。国走夕}臻究缝巢表暖，猴头
菌属菌营养丰富，含有多种活性物质，其中研究最多的、最引起人们注意的是多
糖物覆，露箕撬纯警成分弱轿究莺内拜震豹绞少，嚣强主要莛强本邋蔻年逡雩亍了
一些化学成分及药理学研究，发现了许多重溪的药效成分。菌种鉴定方面，还没
有觅到麸分子水平上采用分予生秘学方法邀行鉴定豹报道。
本论文采用溶剂提取法从小刺猴头菌(Hericium
caput-medusae)予实体
中提取除蛋白质、挟酸、多糖等生物大分予乏外的肖机小分予化学成分，得到四
层撼取浓缀渡，第一层窝第二层化学成分秘类较第三层、第娌层化学成分多，含
有生物碱、盼类化合物、皂瞢、萜类、含氧杂环及挥发油、油脂类椁多种成分，
毽黄蘩类豹矮显色不鹗显，激≤#极瞧魄学裁分鸯圭；第三矮秘燕疆鼷孛碳求纯会
物盥色突出，但第四层与以上各层样品不同，在非极性溶剂及极性溶剂中潜解度
通过系统溶剂分离法、髓相溶剂萃取法、结晶法和层析法分离纯化各层样品，
得到石油醚相、氯仿相、水溶液相和部分结晶。石油醚相部分亿学成分采孀Gc／瞒
联毫fl‘法分柝，分离攘定出18种脂肪酸及其衍生物，绝大多数为脂肪酸酯类化合
物，其中十八碳烷烃链化合物占多数，达7种之多，相对禽量40．44％。程这些
+，℃碳婉：陵链纯会物中，垒甥体爽常见懿疆脂酸、浊酸、驻浊酸、驻寐酸郝蠢t
多以乙酯或甲酯的Jl；式存在，并且是主要成分。在十六种积知结构的化合物中，
除溉灌酸、稼壤酸鹣舞，箕余裁分筠蔑在，j、裁猴头蘩子实俗孛善次掇遂。lO一卡
八碳炔酸酯是小刺猴头菌乎实体秭油醚相中的一个重要成分，相对含量商达
14．31％，它与小刺猴头菌豹蓊理活性之闻脊侮静联系，还蔫在今螽鹣药理学实验
呈塑舅迦垡苎塑塑造堕堂窭——一～
壅茎夔些堂盛坌堑塞墨堕登堕垒
孛逡一步磺突臻定。
检出两种邻苯=甲酸酯化合物，这是一种生产量大，人工合成的商机化含物，
爰予嫠辩生产懿增黧麴，被溺肉乡}环境益溅部门列为优先控麓污染秘，夺裁猴头
菌予实体中禽有此类化合物，可能为环境污染所致。
从得到几十种鳍晶中选敬20号结晶、36号结醅、26号结晶、l号结晶、33
号结晶进行结构分析鉴定，经紫夕}光谱、红夕}光谱、核磁共振谱、质谱、元索分
析、气相色谱、高效液相色谱、薄屡色谱等分析鉴定方法分析，20号结晶、36
号缕燕、26号结最为赤藓锻醛、蘩莓糖醇、本糖酵等糖酵炎纯舍甥，为善次从
小刺猴头菌中提出。l号结晶，33号结晶经上述方法分析鉴定，与文献资料比较，
接溺为二旗类纯会耪，详缨络凌正焱遗一多分爨鉴定串。
为今后筛选高效猴头菌属菌种。本论文从分子水平探讨了猴头菌属菌种的鉴
定方法。默长自由遗区采集、i|芟集猴头蕾弱麓株莛六释(毽牾一释栽培生产藏辣
和～种药用发酵菌株)，首先采用子实体组织分离法分离培弊菌丝，然后通过实
际栽培，将斜面上分离出的蔽丝通过人工培养长出予实俸谶彳亍复原签定。最后
DNA，RAPD)标记，
AmplifiedPolymorphic
采用黠枫引甥扩增多态性(Random
检测各菌株熬因组DNA在这魑区域的多态饿。选出十二种引物：
采，显示出了不用菌种闻DNA扩增鬻谱的多态往，麓异显蘩，其有麓显懿特征往
分小刺猴头谪和猴头菌，表明这些引物可佟为鉴定猴头菌耩菌种的RAPD标记
弓l物。采躅凝类分嫒法褥到樾系图。从楗系鬻中可以器出，藏株T}3舞n菌株T}l一6
亲缘关系最近，其次菌株TH一2和菌株TH-5，菌株TH—l有一定的豢缘关系，而
吉林农业大学博士学位论文
猴头麓化学成分研究及菌种筛选
实体形态学观察为猴头菌；菌株HT-3和菌株HT-6，以及菌株HT-4予实体形态
学麓察戈，l、裁猴头麓，
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山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究
山东中医药大学 硕士学位论文 山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究 姓名：牟宗慧 申请学位级别：硕士 专业：生药学 指导教师：彭艳丽
提要目的：本课题对山东玫瑰花原花青素进行了系统的质量评价研究，建立一种 简便可行的提取分离工艺，对其原花青素进行含量测定，制定其可控的质量标准。 方法：考察了温度、料液比、乙醇浓度、超声时间对玫瑰花中原花青素超声 提取的影响；选用ＡＢ－８大孔树脂对粗提物进行纯化，通过静态吸附和动态吸附 实验，研究对原花青素纯化的影响；用ＨＰＬＣ法对山东产地的１１个品种玫瑰花中原花青素Ｂ：进行了分析。结果：提取温度为３０℃，液料比４０：１，６０％乙醇溶液，超声提取１０ ｍｉｎ为最佳提取条件；ｐＨ为４，用３ＢＶ４０％乙醇以１ ｍｌ?ｍｉｎ。１流速洗脱可获得较纯的玫瑰花原花青素；ＨＰＬＣ法测定玫瑰花原花青素提取物中存在原花青素Ｂ。，其中丰 花的含量最高，紫枝的含量最低。 结论：为综合利用玫瑰花资源及开发含有玫瑰花的新药制剂等方面提供科学的理论实验依据。关键词玫瑰花；原花青素；提取；纯化；ＨＰＬＣＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ ａｎｄ ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＱｕａｌｉｔｙＳｔａｎｄａｒｄ ｉｎ Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ ＰｒｏｖｉｎｃｅＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＰｈａｒｍａｃｏｇｎｏｓｙＡｕｔｈｏｒ：Ｍｏｕ ＺｏｎｇｈｕｉＴｕｔｏｒ：Ｐｅｎｇ ＹａｎｌｉＡｂｓｔｒａｃｔｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｄｅａｌｓｗｉｔｈｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｑｕａｌｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎａｏｆｔｈｅｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ ｆｒｏｍ Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ ｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｓｅｔｓ ｕｐ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔ０ ｉｔｓｓｉｍｐｌｅａｎｄｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ，ｃａｒｒｉｅｓｏｕｔ ｉｔｓｏｎｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ，ｗｏｒｋｓＭｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｓｔａｎｄａｒｄｓ．ｗａｓ ｕｓｅｄａｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｅｔｈａｎｏｌＲｏｓａ ｒｕｇｏｓａ ｔｈｅｓｏｌｕｔｉｏｎｔｏｅｘｔｒａｃｔｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｆｒｏｍａｎｄｓｏｍｅｆａｃｔｏｒｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｈｅｒａｔｉｏｂｅｔｗｅｅｎｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅ；Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｒｕｇｏｓａ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｗｅｒｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓｔａｔｉｃｏｆ ＡＢ?８ｍａ凹ｏｐｏｒｏｎｓ ｒｅｓｉｎ ｏｆ Ｒｏｓａａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄｄｙｎａｍｉｃｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ；Ｔｈｅ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ Ｂ２ Ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｂｅ ａｎｎａｌｙｓｅｄ ｆｒｏｍ １ １ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｏｆ Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｂｙＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｉｓ：ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ ３０＂Ｃ，ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｆｌｏｗｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｍａｔｅｒｉａｌ：４０：１，ｔｈｅ３ ＢＶｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｅｔｈａｎｏｌ：６０％，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅ：１ ０ｍｉｎ；ｐＨ４ ｗｉｔｈｒａｔｅ ｏｆ ｅｌｕｔｉｏｎ ｇｅｔ４０％ｅｔｈａｎｏｌ ｔｏ ｌｍＬ?ｍｉｎ．１ｂｅｔｔｅｒ ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ Ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ；Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ＨＰＬＣｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ｅｘｔｒａｃｔｐｒｏａｎｔｈｏｃ－ｙａｎｉｄｉｎｓｆｒｏｍ Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ ｈａｓ ｔｈｅ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓＢ２，ｔｈａｔ Ｆｅｎｇｈｕａ Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ ｉｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｂｕｎｄａｎｃｅ，ａｎｄ Ｚｉｚｂ＿ｉ Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ ｉｓ ｔｈｅｌｏｗｅｓｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＷｅＲｏｓａ ｒｕｇｏｓａ ａｎｄ ｔｈｅｌａｙａｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｅｖｉｄｅｎｃｅｏｎｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｎｅｗｄｒｕｇ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａａｎｄ ｏｔｈｅｒｓｃｉｅｎｔｉ矗Ｃ ｔｈｅｏｒｉｅｓ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓＲｏｓａｒｕｇｏｓａ；Ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ；Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立完成的，文中除注明引用的内容外，不包含任何其他已经发表的科研成果。 对本文研究做出重要贡献者，均已在文中以明确方式表明。本声明的法律责任完全由自己承担。论文作者签名』鲢导师签名趣日期迦１２：丝［９关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同 意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许 被查阅和借阅。本人授权山东中医药大学可以将本学位论文的全部或 部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印 手段保存和汇编本学位论文。 （保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名ｊ￡基耄一导师签名她日期掣：丝：圣山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究己Ｉ丁ｌ吉口玫瑰（ＲｏｓａＩ＂ｌｌｇｏｓａＴｈｕｎｂ）为蔷薇科蔷薇属多年生灌木类植物，多以花蕾入药，玫瑰花始载于明代姚可成《食物本草》，历代本草如《本草正义》、《本草纲目拾遗》、 《本草再新》等均有所收载，在我国已有两千余年的栽培及药用历史，为我国名贵药 材之一。广泛应用于中医处方配药，具有理气、活血、调经等功效，对肝胃气痛、月 经不调、赤白带下、疮疖初起和跌打损伤等具有独特疗效，泡茶还可治疗食道痉挛引起的上腹胀痛。玫瑰花主产于山东、安徽、浙江、内蒙古等地。山东为主产地之一，主要栽培于 平阴、定陶、单县等地，平阴栽培面积约３＂－－－＇４万亩，定陶、单县栽培面积约１．８万 亩左右。山东平阴因盛产玫瑰而著称于世，１９９６年被国家命名为“中国玫瑰之乡”。 在众多的玫瑰花品种中，平阴玫瑰独居榜首，声誉九州，是药材市场的主流商品。山 东玫瑰栽培面积大，品种繁多，具有很高的药用价值和经济价值，现主要应用于医药 工业、香料工业、食品加工业。另外，还应用于城市绿化、水土保持等方面。 玫瑰花具有很高的食用、药用和化工等价值，国内外多集中在其所含挥发油的研 究，但是对其综合利用研究尚少。玫瑰花挥发油主要用于化妆品行业，而对玫瑰花所 含的非挥发性成分特别是可能具有很高经济价值和药理作用的多酚类成分研究不多， 应用方面研究更少。为开发利用玫瑰花的药用价值和资源，故对其所含有的多酚类物 质进行了系统研究。建立一种简便可行的提取分离纯化工艺，从玫瑰花中分离出纯度 较高的原花青素等多酚类物质。玫瑰花中含有大量多酚类物质，原花青素就是其中的 一部分，不同产地的玫瑰花其含量有差异。原花青素具有水溶、无毒、无过敏等特性， 比儿茶素有更多的自由酚羟基，极性较大，能很好地溶于丙酮、甲醇、乙醇、冰醋酸、 乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、石油醚等有机溶剂，故本实验采用乙醇为提取溶剂，利 用超声波提取原花青素。在食品工业中，常利用超声波的空化作用来促进物理和化学 变化，提高效率，节约原料，改善产品质量等，已经比较广泛地运用于天然植物有效 成分的提取。本实验通过单因素实验和正交实验从超声时间、液料比、提取溶剂浓度 （乙醇）、提取温度四个方面进行考察，最终得出了超声波法提取玫瑰花中原花青素的 最佳提取工艺条件：提取温度为３０℃，液料比４０：ｌ，６０％乙醇溶液，超声提取１０ｍｉｎ。此提取方法具有快速、均匀，节约能源，可在常温下进行等优点。选用ＡＢ一８大山东中医药大学２００９届硕士学位论文孔树脂纯化得出的玫瑰花粗提物，采用静态和动态的吸附一解析试验，分别对样品溶 液的ｐＨ值，不同浓度的洗脱剂（乙醇）和洗脱溶剂的用量、洗脱流速等因素进行了 筛选考察。最终确定了纯化工艺ｔ将玫瑰花粗提液的ｐＨ调为４，将溶液经过ＤＡ２０１ 型大孔吸附树脂（经过预处理），先用蒸馏水洗至洗脱液为无色，再用３ＢＶ４０％乙醇以１ ｍｌ?ｍｉｎｌ流速洗脱可获得较纯的玫瑰花原花青素。建立的玫瑰花色素的纯化分离工艺简便稳定，若能应用于生产，将会具有很大的成本优势，而且其本身具有特殊 的玫瑰香气，能更好地得到消费者认可。综上所述，本研究成果有望对综合利用玫瑰 花资源及开发含有玫瑰花的新药制剂等方面产生积极效果，本研究所建立起来的玫瑰 花多酚类提取分离纯化工艺，具有简便、实用、经济等优点，为将来玫瑰花资源的综合利用开发奠定了坚实的实验研究基础。２山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究第一部分综述１玫瑰花文献综述１．１本草学研究考证 １．１．１名称考证 （－－如亭群芳谱》第二册：。一名徘徊花＂。《广群芳谱》ｎ１花谱：“玫瑰一名徘徊 花＂。有关玫瑰花的名称，古书记载较少，这两本均有“徘徊花＂之名。 到了近代，祖国医学有了进一步的发展，各种医药书籍大量出现，玫瑰花的有关 名称更加丰富。《浙江中药手册?第一集》乜１注：别名：“红玫瑰，笔头花（杭州）， 湖花（嘉兴）＂。《河北药材》口１注：“别名：赤蔷薇花’’。《山东中草药手册》Ｈ１注：别 名：“刺玫，刺玫菊（青岛、烟台）、刺玫塔（昌维）＂。《安徽中草药》瞄１注：别名：“红 玫瑰、红花刺木苔’’。《河北中草药》嘲注：别名：“玫瑰＂。《现代实用中药》口１注：“异名赤蔷薇＂１．１．２基源考证 古代本草记载的玫瑰花来自蔷薇科，如《广群芳谱》ｎ１花谱：“灌生细叶多刺类 蔷薇，茎短花亦类蔷薇，色淡紫者蒂黄蕊瓣，白娇紫色芬馥有香有色，入茶入酒入蜜， 栽亦肥土长加浇灌，性好最忌人溺，溺浇即萎。燕中有黄花者稍小于紫，嵩山深处有 碧色者。’’《本草纲目拾遗》呻１云：“有紫、白二种，紫者入血分，白者入气分，茎有 刺，叶如月季而多锯齿，高者三、四尺，其花色紫，入药用花瓣，勿见火。” 《浙江中药手册?第一集》嘲：“本品为蔷薇科玫瑰（ＲｏｓａｒｕｇｏｓａＴｈｕｎｂ．）的花朵，栽培落叶小灌木，枝间多刺，高１米。叶为奇数羽状复叶，小叶５＂－－９片椭圆 形，夏开重瓣红色花，单生或成数朵，花梗短，有绒毛，花托似壶有刺，果实扁球形， 砖红色，其花有特殊香气。＂ 《河北药材》口３：“属蔷薇科，为小灌木。自生于山野，茎直立，高２至３尺， 枝间多刺，叶为奇数羽状复叶，小叶椭圆形，有锯齿，叶柄有托叶，夏季开紫红色花， 有香味，花落后结长圆形果实。＂ 《山东中草药手册》Ｈ１：“玫瑰ＲｏｓａｒｕｇｏｓａＴｈｕｎｂ．一蔷薇科Ｒｏｓａｃｅａｅ。落叶直立灌木，茎丛生，多分枝，表面灰褐色，密生绒毛，刚毛及皮刺，叶互生，奇数羽 状复叶，小叶５－－－９片，边缘有细锯齿，在总叶柄基部有２片叶状托叶，花单生或数３山东中医药大学２００９届硕士学位论文朵簇生于枝梢，紫色至深红色；花萼５片，两面均有灰白色绒毛，外面还有多数棕色 圆头腺毛；花瓣多数，单瓣或重瓣，香气很浓；雄、雌蕊多数，包于圆球状的花托内， 花期５－＇－－６月。＂ 《安徽中草药》啼１：“为蔷薇科蔷薇属植物玫瑰的花，根也入药。落叶灌木，高 约２米，茎丛生，直立粗壮，多分枝，表面灰白色或灰褐色，散生钩状刺和腺毛，叶 互生，羽状复叶，小叶５＂－－＇７枚，卵形至卵状披针形，长２＂－，６ｃｍ宽ｌ～２．５ａｍ先端锐 尖或圆钝，基部阔楔形或圆形，边缘具细锯齿，表面绿色具皱纹，背面灰绿色，有绒 毛及腺点，总叶柄有绒毛及刺毛，托叶与总叶柄合生，花单生于枝端，有时数朵簇生， 紫红色或白色，芳香，直径约５－－一８ｃｍ，花梗有腺毛及刺毛，花托壶形或近圆形，萼 片５，花瓣５，常重瓣，雄蕊多数，花药紫色，雌蕊多数，花柱不伸出花托口外，蔷薇果扁球形，平滑，成熟时红色，花期５＂－－＇６月，果期６＂－＇７月。’’《河北中草药》∞１：“落叶灌木，高１＂－－２米，密生皮刺，刺毛及绒毛，叶单数羽 状复叶，互生，叶基部常成对着生；小叶５－．一９椭圆形或椭圆倒卵形，上面边缘有钝 锯齿，基部全缘，上面光亮、多皱、无毛，下面苍白色，有短绒毛及腺体，托叶附着 叶柄上，花单生或３＂－６朵簇生，紫色或至白色，花梗有绒毛和腺体，蔷薇果扁球形， 直径２＂－－，３ｃｍ，红色平滑，具宿存萼片。＂ 《青岛中草药》：“蔷薇科植物玫瑰ＲｏｓａｒｕｇｏｓａＴｈｕｎｂ．的花蕾。落叶灌木，茎直立，丛生，粗状，多分枝，表面密被绒毛、刚毛及坚刺，灰褐色或灰白色。叶为奇 数羽状复叶，互生，小叶由下而上渐大，椭圆形先端尖锐或钝尖，基部与叶柄合生， 边缘具细锯齿，上面暗褐色，皱缩，下面密被灰白色绒毛，叶脉羽状，花单生于枝梢， 大形，具花梗；花托呈半球形，花萼５片，披针形或三角状披针形，花瓣５片或多数，紫红色或白色，香气浓，瘦果，近卵形，花期６，－．－，８月。’’《现代实用中药》口３：“蔷薇科，小灌木，茎高三四尺，密生小刺，叶为奇数羽 状复叶，小叶椭圆形，有毛，叶柄基部着生托叶，夏日开花，单瓣，深红色，栽培品， 亦有白色，花供药用。”可见历代本草记载玫瑰花与现代药用玫瑰花基源基本一致。 １．１．３产地考证 《浙江中药手册?第一集》乜１：“主要产区为吴兴（戴林区白龙山），而长兴（泗 安区大云寺）产品次之，杭州（祥符桥产品的笔头花最为上品）亦有少量出产。＂《河 北药材》∞３：“龙关、怀来、蔚县、易县、平山、正定、邯郸、遵化、迁安、昌黎、４山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究青龙、兴隆、隆化、丰宁、平泉和围场县，以及承德市。’’《山东中草药手册》Ｈ１：“载 于庭院或野生于山沟石缝，主产于泰安、聊城、菏泽、烟台等地区。一《河北中草药》 №１：“生于山坡、沟谷，各省均产，亦有栽培。一《青岛中草药》：“喜生于向阳地区粘 性土壤之中。’’《现代实用中药》口１：“多产于南方各省，为农家栽培副产品，辽宁、 山东等海滨沙地并多果产生。一由此可见，自古以来，玫瑰分布范围一直较广泛。１．１．４采收时间考证 关于玫瑰花的采收时间，《本草用法研究》嘲：“立夏前，摘含苞未放者。”到了近代，《浙江中药手册?第一集》乜１：“芒种前后。”《河北药材》【３】：“在夏季产新。＂《山 东中草药手册》Ｃ４］“花入药，５＂－－＇６月花蕾含苞待放时，择晴天，于清晨采花。一百草 镜云：“玫瑰花立夏前含苞未放者。＂《安徽中草药》璐１：“花：５＂－－＇６月将花苞欲放的花 蕾摘下。根：夏秋季采挖。＂《河北中草药》阳１：“夏季含苞欲放时摘下。＂《青岛中草 药》：“６＂－＇８月将含苞待放的花蕾于晴天清晨分批摘来。’’可见，古今玫瑰花采收时间 基本一致。１．１．５加工方法考证《本草用法研究》阳１：“阴干用，忌见火。去心蒂纯用花瓣，紫色者入药。＂赵 氏《纲目拾遗》谓：“紫者入血分，白者入气分，但用花瓣，不宜见火，故收藏者， 多摘取花瓣，置烈日中，薄薄摊之，一日晒干，则色不变，而香不减，若逢阴雨，即 用急火烘之，亦不变色。’’《浙江中药手册?第一集》乜１：“用文火烘干，鲜干折率约４ 市斤折成Ｉ市斤，忌用日晒避免花朵开放和色泽变淡。＂《河北药材》口１：“阴干即可。＂ 《山东中草药手册》Ｈ１：“通气处阴干，如遇阴雨天，可烘干。＂可见，古代和现代加工方法均是阴干、烘干。 １．１．６性味归经考证 姚可成《食物本草》日：“味甘、性微温。’’《随息居饮食谱》载：“甘、辛，温。ｎ叫＂《伪药条辨》日：“味甘、微苦，温，无毒。ｎ¨＂《本草纲目拾遗》载：“入脾、肝经。” 基本一致。 １．１．７功能主治考证 《本草再新》载：“入肝、脾二经。ｎ２伽古代和现代在性味归经方面《本草纲目拾遗》咖：“和血行血，理气治风痹。’’药性考云：“玫瑰性温，行血 破积，损伤瘀痛，浸酒饮益。’’《本草用法研究》阻１：“疏气滞，解肝郁，行瘀和血，５山东中医药大学２００９届硕士学位论文调中开胃。”《食物本草》ｎ ３１：“主利肺脾，益肝胆，辟邪恶之气，食之芳香甘美，令 人神爽。＂《药性考》ｎ４１载：“行血破积，损伤瘀痛，浸酒饮。《本草再新》ｎ翻：“舒 肝胃之郁气，健脾降火，治腹中冷痛，胃脘积寒，兼能破血。（色赤气香故能平肝解郁）。＂《随息居饮食谱》ｎ引：“甘辛温，调中，活血，舒郁结，辟秽，和肝，蒸露熏茶糖收作馅，浸油泽发，其粉悦颜，酿酒亦佳，可消乳癖＂。《本草正义前集》ｎ７１：“玫 瑰花，香气最浓，清而不浊，和而不猛，柔肝醒胃，流气和血，宣通窒滞，而绝无辛 温刚燥之弊，断推气分药之中，最有捷效，而最为驯良者，芳香诸品，怠无甚匹。” 《救生苦海》：“治吐血，玫瑰膏，以花瓣一枚，河水熬浓，白糖收膏，不时服。＂ 《归安凌氏祠鹤亭集方》：“治肝郁，吐血月经不调＂。 《河北药材》口１：“行气、解郁，并有柔肝、止血之效。’’《山东中草药手册》“３： “理气和血，调中解郁。（１）胃痛：玫瑰花三钱，香附四钱，川楝子三钱，白芍三钱， 水煎服。（２）月经不调：玫瑰花三钱，月季花三钱，益母草一两，丹参五钱，水煎服。 （３）肠炎下痢：玫瑰花三钱，白头翁五钱，马齿苋一两，茯苓四钱，水煎服。（４） 白带：玫瑰花三钱，乌贼骨四钱，白鸡冠花三钱，水煎服。’’《安徽中草药》∞１：“行 气和血，解郁调经。＂《河北中草药》∞１：“理气解郁，行气调经。＂《青岛中草药》：“主 治肝经郁结，肝胃气痛，胸隔气滞，月经不调，新旧风痹，跌打损伤等。”《现代实用 中药》忉：“行气解郁、柔肝醒脾、和血理气，治风痹。＂可见，古代和现代玫瑰花功 能主治基本一致。 １．２主要化学成分研究 １．２．１挥发油类成分 玫瑰花中含有多种生理活性成分，文献ｎ８吨¨报道含有挥发油等成分。挥发油类化 合物主要为香茅醇、芳樟醇、栊牛儿醇、橙花醇、苯乙醇、丁香油酚、金合欢醇及其 脂类、玫瑰醚、甲基丁香油酚、６一突厥酮、２一十二烷酮、２一十三烷酮、２一十四烷酮、 ２一十五烷酮等，挥发油类成分具有良好的理气止痛、活血化瘀等作用，还可改善外周 及内脏微循环。 １．２．２多酚类成分 玫瑰花中含有大量多酚类物质如山茶黄素，槲皮黄素和原花青素类化合物，而 山茶黄素，槲皮黄素这类化合物易溶于水，色泽鲜艳，可作食品添加剂，是一类值得 开发的天然色素。６山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究１．２．３其他成分 玫瑰花中含有天冬氨酸、苏氨酸、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸等１８种氨基酸‘一１。此外含有ｌＯ种人体必需的微量元素，测定结果看，铁含量最高，锰、锌含量较 高，铜、铅、钴、硒含量次之，镉、锂最低。１．３药理作用研究玫瑰花作为理气药在祖国医药学中应用历史悠久，具有理气解郁、活血散瘀的功 效，用于肝气郁结所致的胸胁满闷，乳房胀痛，肝胃气痛等。现代药理研究表明，玫 瑰花的药理作用广泛，尤其是对心血管疾病、免疫炎症、肿瘤、氧化以及利胆、解毒等具有良好的治疗作用。１．３．１对心血管系统的作用 张秀兰等乜司用以玫瑰花为主的玫瑰舒心口服液治疗气滞血瘀型冠心病，实验证实 该药能减轻由冠状动脉结扎所致的心肌缺血程度，缩小心肌梗塞范围，作用强度与硝 苯吡啶相似，对心肌梗塞有预防作用，表明玫瑰花有扩张血管作用。 王世军等汹３探讨了在普通香烟基础上加入丹参、玫瑰花等中药提取物，观察局部 滴加中药总提取物对肾上腺素所致小鼠肠系膜微循环障碍的作用，局部滴加中药药物 香烟烟雾水提取物和普通香烟烟雾水提取物对肠系膜微循环的影响。结果表明中药总 提取物有对抗肾上腺素所致微循环障碍的作用；加入该中药提取物的药物香烟烟雾水 提取物所致的微循环障碍较普通香烟烟雾水提取物所致的微循环障碍为轻，说明玫瑰 花具有一定程度的减轻烟草引起的微循环障碍的作用。 王军等田１研究了玫瑰花总提取物对正常状态以及肾上腺素所致微循环障碍时肠 系膜微循环的影响。结果显示，玫瑰花总提取物局部应用可增加微动脉的血流速度， 对微静脉作用不明显。滴加肾上腺素可导致小鼠肠系膜微循环障碍，局部滴加玫瑰花 总提取物后，可加快微循环障碍的恢复。玫瑰花总提取物的上述作用与丹参注射液相 似但较弱。 李宇晶等嘀１研究表明，玫瑰花水煎液可明显降低实验动物缺血心电图中Ｓ－Ｔ段抬 高的幅度，对抗异丙肾上腺素所致大鼠心肌急性缺血性改变，保护缺血心肌ＳＯＤ（超 氧化物歧化酶）的活性，表现出抗脂质过氧化物的作用，同时可明显抑制心肌ＣＰＫ（磷 酸激酸激酶）的释放，减轻由于氧自由基对心肌细胞膜的损坏所造成的损伤。７山东中医药大学２００９届硕士学位论文李红芳等啪１探讨了玫瑰花对血管的直接作用，用离体兔胸主动脉进行灌流实验， 发现玫瑰花水煎剂无论酸性还是中性均可使去甲肾上腺素预收缩主动脉产生明显的 舒张作用，说明其水煎剂含有直接扩张血管的有效成分，并非其中所含酸性物质影响 所致。在其实验中，去除内皮细胞、ＮＯ合成制剂Ｌ－ＮＮＡ或鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲 兰可完全消除玫瑰花舒张血管作用，说明水煎剂扩张血管作用有内皮依赖性，可能与 血管内皮细胞释放的ＮＯ有关。１．３．２抗菌、抗病毒作用ＦｕＭ等呦１研究玫瑰花水煎剂对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌及结核杆菌均有抑制作用，玫瑰花提取物对人免疫缺陷病病毒（艾滋病病毒）、白血病病毒和Ｔ细胞白血病病毒均有抵抗作用。其所含长梗马兜铃素和新唢呐素Ｉ对感染小鼠白血病病毒细胞 的逆转录酶有抑制作用，其ＩＣ∞分别为０．０４ｕ ｇ?ｍｌ。１和０．１０ｕ ｇ?ｍｌ一，小鼠灌服这两 种成分的ＬＤ∞均大于１００ｍｇ?ｋｇ～。１．３．３抗氧化作用牛淑敏等∞¨采用测定红细胞溶血抑制率、肝组织匀浆脂质过氧化物产物，超氧化 物歧化酶（ＳｏＤ）活性测定方法和现代分子生物学技术ＲＴ－ＰＣＲ基因扩增法检测中药材 玫瑰花对小鼠体内抗氧化作用，并探讨了抗氧化机制。经体内实验，玫瑰花对不同月 龄小鼠的抗氧化效果不同，对８月龄以上的小鼠抗氧化作用效果显著，同时明显提高 了ＳＯＤ基因的表达量。结果表明，中药材玫瑰花对衰老的小鼠不仅在组织水平上和细 胞水平上有显著的抗氧化作用，而且在分子水平上能提高基因表达量，其含有的高效 抗氧化成分，是一种良好的天然抗氧化剂。１．３．４解毒作用玫瑰花水煎剂能解除小鼠口服地锑剂的毒性反应，但仅对口服酒石酸锑钾有效， 且同时使其抗血吸虫作用消失，故这一作用可能是玫瑰花煎剂改变了酒石酸锑钾的结 构所致㈨。１．３．５利胆作用玫瑰油对大鼠有促进胆汁分泌的作用啪３，能明显改善肝炎恢复期及胆囊炎、胆结 石症发作期的症状。 １．３．６抗肿瘤作用 儿茶精类物质有烟酸样作用，可用于放射病的综合治疗，并有抗肿瘤作用ｍ１。８山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究２原花青素的综述 ２．１原花青素的结构性质原花青素（ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ，简称ＰＣ），是植物王国中广泛存在的一大类多酚化合 物的总称陟１。起初统归于缩合鞣质嘲１或黄烷醇类∞１，随着分离鉴定技术的提高和对此 类物质深入研究，现已经成为独树一帜的一大类物质称之为原花青素。１９６１年，德国Ｋａｒｌ等从英国山楂Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｏｘｙａｃａｎｔｈａ新鲜果实的乙醇提取物中首次分离出两种多酚化合物。１９６７年，Ｊｏｓｌｙｎ等又从葡萄皮和籽提取物中分离出４种多酚化合物。他 们得到的多酚化合物在酸性介质中加热均可产生花青素（ｃｙａｎｉｄｉｎｓ），故将这类多 酚化合物命名为原花青素。 原花青素是由不同数量的儿茶素或表儿茶素缩合而成。最简单的原花青素是儿茶 素或表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等直至十 聚体踟。按聚合度的大小，通常将二～四聚体称为低聚体（ｐｒｏｃｙａｎｉｄ０１ｉｃｏｌｉｇｏｍｅｒＳ，简称ＯＰＣ），将五聚体以上的称为高聚体（ｐｒｏｅｙａｎｉｄｏｌｉｃ ｐｏｌｙｍｅｒｓ，简称ＰＰＣ）。二 聚体中，因两个单体的构象或键和位置的不同，可有多种异构体，已分离鉴定的８种 结构形式分别命名为Ｂ。～Ｂ８，其中Ｂ。～Ｂ。是由Ｃ。一Ｃ。键和，Ｂ。～Ｂ。是由Ｃ。一Ｃ。键和。在各 类原花青素中，二聚体分布最广，研究最多，是最重要的一类原花青素啪１。主要二聚 体的结构如图１所示。―ｈ＿＿－??－一●，一?ｏ●‘＾’咐＿＿ｍ～＾ｒ＿ｔ一―ａＨ矿矿 簿 藩√审√审＾＿?－－＿～一＿‘酽－州――＿――●＇＾时?ａＨ一州图１原花青素二聚体的结构图 ２．２原花青素的主要性质９山东中医药大学２００９届硕士学位论文原花青素具有水溶、无毒、无过敏等特性。原花青素在热酸条件下能够生成红色的花青素，此性质可用于原花青素的定性和定量分析。结构中具有较多的羟基，具有较大的极性，使其能够很好的溶解于水、甲醇、丙酮、乙醇等极性溶剂而不溶解于苯、 氯仿、石油醚等非极性物质。较多羟基结构也使其成为良好的氢原子给予体，具有较 强的抗氧化作用。研究表明，在Ｏ：一、?ｏＨ、?ＣＨ中，原花青素对０：一?清除能力最好， 而且在聚合度２，．－５范围内，随聚合度增加而增加。对其构效关系分析表明，带有没食 子酰基的原花青素具有更强的抗氧化活性，二聚体的抗氧化活性均比单体儿茶素的活 性强。Ｃ―Ｃ连接的二聚体比Ｃ―Ｃ连接的三聚体具有更强的抗氧化活性。原花青素的最 大吸收波长在２８０ ｎｍ附近，故具有较强的紫外吸收能力。 ２．３原花青素的生物活性研究 研究表明，原花青素具有极强的抗氧化特性，一般存在于植物的果实、种子、 花和皮中，在葡萄、山楂、花生、银杏、白桦树、松树等植物中的含量都很丰富【３９】。 原花青素具有多种生物活性，对多种疾病有防治作用，以其高效、低毒、高生物利用 率而著称。在植物中其主要作用是保护植物中易被氧化的成分，在人体内的抗氧化和 清除自由基的能力是维生素Ｅ的５０倍、维生素Ｃ的２０倍‘艄¨，并且还具有保护心血管、 预防高血压、抗肿瘤、抗辐射、抗突变及美容等作用Ｈ羽，并且可降低中风、帕盒森症、 退化性老年痴呆症、肿瘤、癌症等的发病危险，延长人的平均寿命，是一种应用前景 十分广阔的植物功能成分Ｈ３删。它能通过血脑屏障到达脑部，防治中枢神经系统疾病， 尤其对皮肤的保健、年轻化及血管的健康、抗炎症作用特别显著。近１０年来在北美保 健食品业和化妆品业得到广泛应用，年销售额超过１亿美元。 ２．３．１清除人体自由基和抗氧化活性 原花青素含有大量的活性酚羟基，是氢的供体，能有效清除多种活性氧自由基，具 有极强的抗氧化活性。Ｐｒｏｖｏｓｔ等Ｈ５３研究了原花青素对超氧阴离子自由基的清除活性 和对羟基诱导的ＤＮＡ损伤的抑制作用。发现这些多酚化合物清除自由基的能力与它们 的化学性质和立体结构密切相关。即使在葡萄酒中浓度很低时原花青素也能有效地清 除自由基。葡萄或葡萄酒中原花青素的活性要比其他一些天然抗氧化剂（例如维生素 Ｃ、没食子酸等）更强。Ｂａｇｃｈｉ等Ｈ６１也证实了原花青素对氧自由基有浓度依赖的抑制 作用，且较维生素Ｃ（Ｖｉｔ Ｃ）和维生素Ｅ（Ｖｉｔ Ｅ）更有效。Ｌｕ等Ｈ７１研究发现原花青素对 ＰＭＡ诱导的氧化应激具有很强的拮抗作用。其可以阻止ＰＭＡ诱导产生的多形核白细胞１０山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究释放Ｈ：０２以及抑制ＮＩＨ３％细胞氧呼吸爆发的活性。同时，该实验还证明原花青素能保 护由ＰＭＡ诱导的肝脏中线粒体的脂质过氧化反应。Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等啪１利用谷氨酸盐诱导 的神经细胞毒性模型研究了原花青素的抗氧化活性，发现从一种法国松树皮中提取的 原花青素能保护神经胶质细胞免受谷酸盐的损害，提示其具有抗氧化活性。Ｋｏｇａ等Ｈ 钉研究了一次给予从葡萄籽中提取的原花青素对大鼠血浆抗氧化水平的影响。与对照 组比较，原花青素组对硫酸铜或２一咪唑丙烷双氢盐酸氧化形成的胆固醇过氧化氢酯 （ＣｈＥ－ＯＯＨ）更具有抵抗力。说明摄入原花青素可提高血浆对氧化应激的抵抗力。Ｒｏｎｇ 等嘞１用有机氧化剂ｔ一丁基氢过氧化（ｔＢＨＰ）孵育牛的单层肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ），发 现前者可降低细胞生存力，增加细胞内乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的释放和脂质过氧化产物丙 二醛（ＩＤＡ）的产生。而在暴露于ｔＢＨＰ以前预先用原花青素孵育ＰＡＥＣ，可明显提高细 胞生存力，减少ＬＤＨ释放和ｉＤＡ产生。证明原花青素能保护血管内皮细胞受氧化性损伤。Ｎｏｄａ等∞妇通过ＪＥＳ－ＦＲＳＯ ＥＳＲ分光仪对天然植物、健康食品和抗氧化物质进行羟基自由基、超氧负离子清除活性试验，证实了ＰＣ捕获羟基自由基能力仅次于绿茶提取 物而强于银杏叶提取物（ＥＧｂ７６１），在抗氧化方面则次于ＥＧｂ７６１，强于Ｂ一儿茶素。 原花青素的抗氧化活性与其结构有密切的相关性，不同聚合度和构型的原花青素 的抗氧化能力也不同。ＰＣ的聚合度对其生物活性也存在着影响ｂ７１。Ｐｌｕｍｂ等嘞３对儿茶 素和ＰＣ抗氧化性研究发现：ＰＣ抗氧化活性在油相中随聚合度增加而降低，在水相中 抗氧化性从单体到三聚体是增加的，而从三聚到五聚体却是逐步下降的。此外，，Ｐｌｕｍｂ 等还对它们的构效关系进行研究。研究显示儿茶素与Ｐｃ二聚体桔酰化产物抗氧化活 性在油相中减少，而在水相中增强；对儿茶素糖基化实验证明其产物在油、水两相中 抗氧化活性均下降。以上试验结果提示原花青素是良好的天然抗氧化剂，通过清除体 内过多的自由基，抑制脂质过氧化，维持体内自由基和抗氧化酶之间的平衡，与体内各 种抗氧化酶共同维持机体的稳态，从而预防由于自由基或脂质过氧化造成的各种疾 病，比如疲劳、辐射损伤、细胞衰老等都与自由基损伤有关，原花青素同样可以发挥 抗疲劳、抗辐射损伤、抗衰老等作用。２．３．２心血管保护抗高血压：７０年代初，Ｍｉｃｈａｕｄ就已指出：ＰＣ单体不能单独作为一类抗高血压药， 但是由于它们具有血管保护作用，能小幅度地调节动脉压，因而可以在长期治疗中服 用。后来的实验证实矧，在体外ＰＣ不仅可以拮抗组胺或ＰＧＦ２诱导的动脉收缩，而且山东中医药大学２００９届硕士学位论文可以抑制血管紧张素Ｉ转换酶（ＡＣＥ），对有中风倾向的原发性高血压大鼠长期给予天 然鞣质可延长它们的寿命。 流行病学研究发现，血压水平随年龄而增高，尤其是收缩期高血压，在老年人中 较为常见。Ｐｒｅｕｓｓ等∞３１应用Ｆ３４４／ＢＮ大鼠对ＰＣ的作用进行了长达１年多的研究。实 验前两组大鼠的平均收缩压（ＳＢｐ）均为１２２ｍｍＨｇ（ｉｍｍＨｇ＝Ｏ．１３３３ｋＰａ）。在实验的前７个 月，对照组的平均ＳＢｐ渐升至１４０ｍｍＨｇ，并在随后的７～８个月中维持在此水平。而 应用ＰＣ、铬剂及锌剂的实验组，其平均ＳＢｐ在实验的前４个月渐下降，最低可达１１Ｏ一１１４ｍｍＨｇ，随后则逐渐上升达到实验前的水平（１２０ｍｍＨｇ），但此时与对照组相比仍有显著性差异（Ｐ＜Ｏ．００１）。提示ＰＣ与铬剂和锌剂联合应用能够防止与年龄增长有关的血 压升高。 内皮依赖性血管舒张活性：Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｅｋ等泓１发现，原花青素（１，－一ｌＯｍｇ?ｍＬ。１）在 体外实验中以浓度依赖的方式舒张由肾上腺素、去甲肾上腺素、脱羟肾上腺素等收缩 的大鼠主动脉环。去除主动脉环的内皮则无此作用，表现出一种内皮依赖性的血管舒 张作用（ＥＤＲ）。提高ＮＯ水平可引起ＥＤＲ反应，而使用ＮＯ合成酶（ＮｏＳ）抑制剂Ｎ一甲基一 Ｌ一精氨酸（ＮＭＡ）则抑制ＥＤＲ，后一情况可以通过添加Ｌ一精氨酸（ＮＯＳ正常底物）逆转。 如果将主动脉环暴露在高水平的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）中，原花青素仍能诱导ＥＤＲ持 续存在。提示原花青素引起ＥＤＲ的机制与其清除超氧阴离子自由基无关。这些结果说 明原花青素除了抗氧化活性外，还可刺激内皮ＮＯＳ活性，增加Ｎ０水平，而抵抗肾上 腺素和去甲肾上腺素的缩血管作用。Ｋａｒｉｍ等畸５１在新西兰兔的主动脉环上进行了该项 实验，证实了从可可中提取的原花青素可引起通过激活内Ｃａ２＋依赖性ＮＯＳ介导的ＥＤＲ。 Ｋｉｍ等嘞１发现从山植中提取的原花青素能缓解离体大鼠主动脉血管紧张性，并引起周 期性的一磷酸鸟苷（ＧＭＰ）产生增加。另外，原花青素引起的这两个反应均能被亚甲兰 或ＮＭＡ所阻断，但不能被吲哚美辛所阻断：原花青素引起的血管舒张作用不受阿托品、 盐酸苯海拉明、普萘洛尔、尼福地平、维拉帕米和优降糖等的影响，但能被四乙铵明 显降低。这些结果说明原花青素引起的内皮依赖性Ｎ０介导的血管舒张作用可能是通 过激活四乙铵敏感性的ｌ（＋通道而发挥的，而与花生四烯酸代谢通道、Ｍ＿受体、Ｈ一受体、 Ｂ一受体、Ｃａ２＋通道等无关。 抗缺血一再灌注损伤：Ｆａｃｉｎｏ等瞄７１研究了原花青素对大鼠心肌缺血一再灌注顿抑后血液动力学的影响。结果表明：补充了原花青素的年幼和年老组大鼠，缺血一再灌注１２山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究末在室舒张压（ＬｖＤＰ）恢复率分别为９３％和７４％（ｐ＜Ｏ．０１），冠脉灌注压（ＣＰＰ）的改变与缺 血前保持接近：肌酸激酶（ＣＫ）流出量维持在基线水平。同时，原花青素明显增加血浆 总抗氧化剂水平（ＴＲＡＰ）（年幼组４０％，年老组３０％）及血浆Ｖｉｔ Ｃ水平，而趋向于降低血浆Ｖｉｔ Ｅ含量。该结果提示给大鼠饮食中补充原花青素，能使心脏对缺血一再灌注 损伤的敏感性降低。Ｓａｔｏ等删不但证实了葡萄籽原花青素对心肌缺血一再灌注损伤有抑制作用，而且 对其机理进行了研究。与对照组相比，原花青素组可以促进缺血一再灌注后心脏收缩 功能的恢复，心肌梗死范围明显减小。荧光测定显示，原花青素能直接清除氧自由基。 提示原花青素对心肌缺血一再灌注损伤具有抑制作用，其机理可能部分归因于直接清 除过氧自由基和羟基，减少缺血一再灌注过程中的氧化应激作用。１９９２年，Ｋｈｕｓｈ嘲 对豆科植物骆驼刺（Ａｌｈａｇｉ ｐｓｅｕｄｏａｌｈａｇｉ）中ＰＣ研究发现当静脉血浓度达５＂－－－１０Ｉｌｌｇ?ｋｇ－１时，正常大鼠和兔的血液动力学和心脏收缩没有变化，而有心肌梗死实验动物 服用该药物后，能减少动物血清磷酸肌酶酐水平以及血清中脂质过氧化，同时能缩小 心肌坏死区域并使之消失。１９９６年，Ｆａｃｉｎｏ等侧证明了用ＧＳＰＣ１００－－－２００ｇ?Ｌ－１灌注心脏，可剂量依赖性地降低局部缺血期心室挛缩，降低冠状动脉灌注压，改善再灌注时 心肌机械功能，增加灌注前及再灌注期间心肌向灌注液释放６一酮一ＰＧＦ。Ｑ。，而严重缺 血时则可抑制心律失常的发生。１９９９年，Ｆａｃｉｎｏ等№¨又观察了大鼠服用ＧＳＰＣ３ ｗｋ后其心脏缺血一再灌注顿抑前后血流动力学的变化。结果发现在补充了ＰＣ的年幼和年 老大鼠组，缺血一再灌注末左室舒张压较缺血前恢复率分别为９３％和７４％（Ｐ＜Ｏ．０１），冠 脉灌注压的改变与缺血前保持接近，肌酸激酶流出量维持在基线水平，在缺血期和再 灌注期心脏灌流液中前列腺素水平较缺血前增加了２倍。同时，Ｐｃ明显增加血浆中总 抗氧化剂及Ｖｉｔ Ｃ水平。实验没有观察到尿酸的明显变化。这项研究的结果提示在大 鼠（年幼和年老）饮食中补充ＰＣ，能使心脏对缺血一再灌注损伤的敏感性降低。 抗动脉粥样硬化作用：动脉粥样硬化是一种进展性、系统性疾病，与生命早期的生 活方式密切相关，通常经过相当长的时间后方出现临床症状，有些患者也可长期处于 无症状状态。动脉粥样硬化斑快的形成和破裂是一个相当复杂的过程田别。Ｂａｓ等旧１ 研究表明原花青素通过降低血浆甘油三脂（ＴＧ），游离脂肪酸（ＦＦＡ），载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）， 低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ），载脂蛋白ＡⅡ、Ｃ Ｉ、ＣＩＩＩ的水平，同时升高高密度脂蛋白 胆固醇（ＨＤＬ）、肝脏小异聚体ｍＲＮＡ（ＳＨＰ）、７一Ｑ胆固醇羟化酶（ＣＹＰ７－Ｑ）、胆固醇生物山东中医药大学２００９届硕士学位论文合成酶水平，以及肌肉和脂肪中的脂蛋白脂肪酶ｍＲＮＡ的水平，从而降低动脉粥样硬化 形成的危险，发挥降低冠状动脉疾病的作用。该实验中原花青素处理组与对照组相比，ＴＧ、ＦＦＡ下降了５０％左右，ａｐｏＢ下降了６０％，ＬＤＬ及ａｐｏＡ ＩＩ、ＣＩ、ＣＩＩＩ和ＨＤＬ与对照组相比也均有统计学显示性差异（Ｐ＜Ｏ．０５），ＳＨＰ、ＣＹＰＴ－Ｑ、胆固醇生物合成酶、肌肉和脂肪中的脂蛋白脂肪酶ｍＲＮＡ分别比对照组增加了３．０、２．４、１．５、１．５７和Ｏ．５７ 倍，有力的证明了原花青素的预防心血管作用。Ｙａｍａｋｏｓｈｉ㈣１研究了葡萄籽原花青素对家兔的抗动脉粥样硬化作用。用原花青素 加胆固醇喂养的家兔，其血浆胆固醇过氧化氢酯水平较单纯喂饲胆固醇的家兔要低， 但低密度脂蛋白（ＬＤＬ）无变化。喂饲原花青素家兔的主动脉ＭＤＡ含量减少，严重主动 脉粥样硬化发生率降低。免疫组织化学分析提示，用原花青素喂饲家兔的主动脉粥样 硬化的损伤中，巨噬细胞摄取氧化型ＬＤＬ以后转变成泡沫细胞的数量减少。在同一项 研究中，给大鼠喂食原花青素以后，可在血浆中检Ｎ－Ｎ原花青素，但在脂蛋白（ＬＤＬ 加ＶＬＤＬ）中不能测得。在另一项体外实验中，将原花青素加至人体血浆，可抑制ＬＤＬ 中亚油酸胆固醇酯的氧化，但在从预先给予原花青素的血浆中游离出来的ＬＤＬ则无此 作用。提示原花青素可以捕获水溶性物质（例如血浆、动脉壁间质液等）中的活性氧， 从而抑制ＬＤＬ的氧化，表现出抗动脉粥样硬化的活性。 抗血小板凝聚和防止血栓形成（调节血小板活性）：Ｒｅｉｎ等雎副发现在体外人全 血中加入原花青素可增加ＰＡＣ一１结合及Ｐ－选择蛋白的表达，但不能抑制肾上腺素引 起的血小板活化。原花青素在体外可减少血小板对促效剂的反应。研究结果显示，原 花青素可增加未受刺激的血小板活化标记的表达。Ｐｕｔｔｅｒ等呻１比较了原花青素与阿 司匹林对吸烟诱导的血小板聚集的作用。在德国高体重吸烟者中，阿司匹林５００ｍｇ 或原花青素ｌＯＯｍｇ可防止吸烟后因血小板活性增加引起的血小板聚集。在另一组美国 吸烟者中，原花青素２００ｍｇ比１５０ｍｇ或ｌＯＯｍｇ的抑制作用更明显，表现出剂量依赖性。 该研究还发现，一次服用原花青素２００ｍｇ对吸烟诱导的血小板聚集的抑制作用可维持 ６天。结果表明，原花青素１００、１５０ｍｇ与阿司匹林５００ｍｇ抑制吸烟诱导的血小板聚集的作用是相同的。阿司匹林能使出血时间明显延长（由１６７ｓ延长至２３６ｓ，Ｐ＜Ｏ．０１），而原花青素则无此作用，提示原花青素更为安全。 台湾学者的研究显示其中ＰＣＢ。－Ｃ、ＥＥＣ和Ｃ－１能显著抑制血小板凝聚口刀，他们发 现在通过脂肪酸环氧合酶途径的花生烯酸代谢过程中，ＰＣＢ。－Ｓ能通过外流性花生烯酸１４山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究处理过的血小板抑制ＴＸＢ：删Ｔ形成。在游离细胞体系中Ｂ：一Ｓ能显著抑制在血小板微粒 体和胞液中的ＴＸＢ：和１２－ＨＥＴＥ的生物合成，提示ＰＣ抑制血小板凝聚的机制是抑制凝 血氧烷的生物合成。 ２．３．３免疫调节活性 Ｌｉｕ等∞７１研究了原花青素对老化小鼠（ＳＡＭ）免疫和造血功能不全的作用。喂食原 花青素２个月后，明显提高其Ｔ淋巴细胞和Ｂ淋巴细胞功能，还增强其骨髓造血干细 胞的增殖活性。 Ｃｈｅｓｈｉｅｒ等㈨研究了原花青素对喂食甲醇或感染鼠逆转录病毒引起的小鼠免疫 功能不全的作用。原花青素能动态调节小鼠的免疫功能，增加白介素－２（ＩＬ－２）的产生。 在体外，原花青素能减少逆转录病毒感染小鼠细胞产生高水平的ＩＬ一６，减少喂饲甲 醇小鼠脾细胞产生高水平的ＩＬ－ＩＯ，还可增加天然杀伤细胞的细胞毒活性。 ２．３．４抗癌 乳腺癌：Ｈｕｙｎｈ等晒１发现从松树皮中提取的原花青素能选择性诱导人乳腺癌细胞 凋亡。人乳腺癌细胞（ＭＣＦ－７）和正常人乳腺细胞（ＭＣＦ－ＩＯ）分别置于含有原花青素的培 养基中培养，融合时取细胞，染色后检测细胞凋亡情况。结果表明，用原花青素处理 的ＭＣＦ－７细胞凋亡数比未处理的ＭＣＦ－７细胞高得多：而在ＭＣＦ一１０样品中，原花青素并 未明显改变凋亡细胞的数量。 前列腺癌：Ａｇａｒｗａｌ等哪！发现用原花青素（１０～ｌＯＯｍｇ?ｍＬ～，２－－－６天）处理的人前 列腺癌ＤＵｌ４５细胞生长明显受到抑制，且呈剂量和时间依赖。使用原花青素２天后， ５０、７５及ｌＯＯｍｇ?ｍＬｌ剂量组分别有２７％、３９％及７６％的细胞生长受到抑制。而经４天 和６天的ｌＯ，－－－ｌＯＯｍｇ?ＩｌｌＬｌ原花青素处理后，分别有２８％一－９７％及１２％～９８％肠的细胞生 长受到抑制，最终致细胞凋亡。在分子机理研究中，经原花青素２５－一７５ｍｇ?ｍＬｌ处理 的ＤＵｌ４５细胞，Ｃｉｐｌ／ｐ２１增加１．９倍，细胞周期蛋白激酶ＣＤｌ（４、ＣＤＫ：及细胞周期调节蛋白Ｅ（ｃｙｃｌｉｎ Ｅ）均明显减少（分别减少９０％、５０％及６０％，Ｐ＜Ｏ．００１）。用原花青素处理ＤＵｌ４５能以剂量依赖的方式诱导Ｇ。期的细胞静止。在其他前列腺癌细胞系中， 也可观察到原花青素抑制癌细胞生长及诱导癌细胞凋亡的作用。研究结果表明原花青 素有很强的抗前列腺癌发生的作用，这可能与调节有丝分裂、影响细胞周期、诱导 Ｇ。期的细胞静止、抑制细胞生长及凋亡等作用有关。 皮肤癌：Ｚｈａｏ等ｍ１用７，１２一二甲基苯并葸激发小鼠皮肤癌后，给予原花青素后能１５山东中医药大学２００９届硕士学位论文明显抑制十四烷酰佛波醇乙酸酯（ＴＰＡ）对肿瘤发生的促进作用。结果表明，原花青素能剂量依赖地减少肿瘤的发生率、多样性和体积。 Ｂｏｍｓｅｒ等口２３也对原花青素抑制ＴＰＡ诱导的小鼠皮肤癌发生的活性进行了研究， 其活性由两种肿瘤标志物鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）和髓过氧化物酶（ＭＰＯ）的活化进行评价。 小鼠皮肤预先分别用原花青素５、ｌＯ、２０及３０ｍｇ处理，由ＴＰＡ诱导的表皮ＯＤＣ活性 分别降低２７％、３７％、４８％及７０％，且呈剂量依赖。原花青素还可明显降低ＭＰＯ活性， 抑制皮肤癌最终的发生。这些结果显示，预先给予原花青素具有抗ＴＰＡ诱导的皮肤癌 发展的作用。该作用机理部分地与其抑制ＴＰＡ诱导的表皮ＯＤＣ和ＭＰＯ活性有关。 其他癌症：ＮＮＫ是烟草中一种需要细胞色素Ｐ４５０酶代谢激活的特有的亚硝胺，Ｈｕ ｙｎｈ等口３３发现原花青素在大鼠的肺和肝微粒体中能浓度依赖地抑制ＮＮＫ代谢。在肺微 粒体中，原花青素能抑制ＮＮＫ活化，但在肝微粒体中则无此作用。提示原花青素对Ｎ ＮＫ诱导的肺癌可能有化学保护作用，但对ＮＮＫ诱导的肝癌则无保护作用。 Ｙｅ等口４１还观察到原花青素对Ａ＿４２７肺癌、ＣＲＬ一１７３９人胃腺癌、Ｋ５６２慢性髓细胞白血病细胞，均具有浓度和时间依赖的细胞毒活性。２．３．５对急性肾功能衰竭的保护作用 Ｓｔｅｆａｎｏｖｉｃ等口踟研究了在甘油诱导的实验性急性肾功能衰竭（ＡＲＦ）模型中原花 青素的保护作用。第１天给大鼠注射５０％甘油（８ｍＬ?ｋｇｑ）建立ＡＲＦ模型，然后腹腔注 射原花青素（２０ｍｇ?ｋ９１?ｄ’１）或生理盐水连续３天。９６小时后处死大鼠，观察肾脏形 态并测定肾皮质ＭＤＡ含量。结果发现原花青素组较对照组大鼠血尿素氮和肌酐水平明 显降低，肾皮质ＭＤＡ含量明显减少（Ｐ（Ｏ．０１）。提示原花青素对甘油诱导的ＡＲＦ有抑制 作用，该作用与其抗氧化活性有关。 Ａｖｒａｍｏｖｉ等口础建立与以上ＡＲＦ相同的大鼠模型，用立体学方法量化有关的肾脏 形态学变化，证实了原花青素对肾脏的保护作用。发现使用原花青素组肾小管管内腔 容积密度和管内物明显减小（Ｐ＜Ｏ．００１），且肾功能明显改善。他们提出原花青素对甘 油所致ＡＲＦ的抑制作用除了与其抗氧化活性有关外，还可能与其舒张肾血管有关。２．３．６抗高血糖作用无论是Ｉ型还是ＩＩ型糖尿病，高血糖是其典型特征，而降低血糖能延缓糖尿病并 发症的出现。目前对降低血糖所涉及的分子结构和信号传导通路的研究已经取得明显 进展口７１引。胰岛素是降低血糖的最有效的物质，其通过与细胞表面的胰岛素受体结合，１６山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究启动胞内酪氨酸激酶并激活磷脂酰肌醇－３（Ｐ１３Ｋ），而Ｐ１３Ｋ进一步激活葡萄糖转运体一 ４（ＧＬＵＴ一４）从而达到降低血糖的效果。但是也有人提出另一个信号通路的假设，即不依赖于Ｐ１３Ｋ，而是直接与胰岛素相关的ＧＬＵＴ一４口删。Ｐｉｎｅｎｔ等陋１１研究发现，原花青素处理组大鼠喂饲１ｈ后血浆中葡萄糖浓度显著低于对照组，而禁食７ｈ后，处理组大鼠血浆中葡萄糖浓度略低于对照组，说明原花青素抗高血糖的作用主要是通过在肠道内延缓葡萄糖的吸收以及对胰岛素敏感组织发挥胰岛素样的作用而达到的。Ｗａｌｔｎｅｒ―Ｌａｗ等 蚴提出，原花青素具有的胰岛素样作用是通过其氧化还原状态的改变影响胰岛素信号 系统中胞内某些介质的功能状态，进而促进肝细胞摄取葡萄糖，增加肝糖原的合成，降 低血糖浓度而起到降低高血糖的作用。 因此，原花青素主要是通过增强胰岛素降血糖的效果来发挥抗高血糖作用的，其 本身并不具备直接降血糖的作用。另外，其是否能诱导胰岛素基因表达增加尚不明确， 需要进一步的试验验证。 ２．３．７抗致突变活性 研究表明：环境污染，尤其是周围的致突变物质是导致人体组织细胞发生基因突 变的重要原因。一些学者建议用天然抗致突变物质，如多酚化合物，抵御致突变的侵 袭。近年来，一些与线粒体和细胞核有关的体外实验表明原花青素在这方面有着令人 振奋的潜力。一些研究观察到：原花青素可抑制癌细胞生长及诱导细胞调亡呻删。中 国科学家实验结果表明葡萄籽中的原花青素对鼠伤寒沙门氏菌有明显的抗诱变作用。原花青素的抗致突变活性可部分地归因于它的抗氧化活性，同时也为其用于预防慢性变性疾病提供了理论基础。２．３．８降低毛细管通透性（抗炎活性）原花青素可降低炎症时炎性介质组胺、缓激肽等引起的毛细血管通透性增高，从 而改善毛细血管的抵抗力和通透性，减少毛细血管壁的脆性，使毛细血管的张力和通透性减小，保护毛细血管的物质转运能力嘶１。 ２．３．９其他药理活性此外，ＰＣ还具有减轻水肿、抑制酶活性、保护肝脏、抗病毒、抗真菌活性、抗溃 疡、抗腹泻活性、抗抑郁、促进毛发生长等功效，对治疗外周静脉功能不全、眼科疾病以及淋巴水肿等疾病均有很好的疗效‘蚋¨，正是由于原花青素具有诸多确切的药理活性，且来源广泛，毒副作用低，遂成为具有广阔发展前景的植物药。１７＾东中Ｅ药＾学２Ｄ０９＊项±学位论￡第二部分玫瑰花原花青素的提取在食品工业中，常利用超声波的空化作用来促进物理和化学变化，提高效率，节 约原料，改善产品质量等，该方法已经比较广泛地运用于天然植物有效成分的提取９ 坤”。利用超声波提取原花青素，具有快速、均匀，节约能源，可在常温下进行等特 点。１Ｉ。李风英等…１通过对微波联合水浴浸提和单纯水浴提提的原花肯素的紫外图谱显 示，短时微波处理对原花青素的分子结构投有破坏作用。目前，有关原花青素提取的 报道比较多哺删，但有关玫瑰花中超声波法提取原花青素的研究报道甚少。本实验以 原花青索的提取过程为对象，研究超声条件下不同因素变化对原花青素提取率的影 响，为优化玫瑰花中原花青索的提取工艺做了一定的探索，并为玫瑰花中原花肯素的 深加工和生产出高附加值的保健产品提供参考依据。１实验材料、试剂与仪器 １．１实验材料玫瑰花购自山东甲阴玫瑰花种植园（经本校生药系教研室彭艳阴教授鉴定为蔷薇 科植物玫瑰（ＲｏｓａｒｕＥｏａａＴｈｕｍｂ）的干燥花蕾）。见图２。图２玫瑰花药材图ｌ２试剂 ９５％乙醇，无水乙醇，蒸馏水； 原花青素对照品（含量＞９５％，天津尖峰天然产物研究开发有限公司）１３仪器ＵＶ一７５２Ｎ紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）：山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究ＲＥ－５２型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；ＳａｒｔｏｒｉｕｓＣＰ２２５Ｄ型电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；ＫＱ－２５０Ｅ型超声振荡清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）。 ２实验方法２．１提取方法取５个干燥锥形瓶，精密称取一定质量的玫瑰花粉末５份，分别加入规定剂量、 一定浓度的乙醇溶液，在指定温度下超声提取一定时间，抽滤，减压蒸馏后得到玫瑰 花原花青素粗提物样品，用无水乙醇溶解，抽滤后滤液用无水乙醇稀释到５０ｍＬ，精 密吸取ｌｍＬ，用无水乙醇定容到５０ｍＬ，摇匀，再精密吸取ｌｍＬ，用无水乙醇定容到５ ｍＬ，摇匀，在２８０ｎｍ处以无水乙醇为空白测吸光度Ａ，并根据工作曲线计算原花青素 浓度，得玫瑰花的提取物中原花青素的含量。 ２．２分析方法精密称取２．６ｍｇ原花青素化学对照品，用无水乙醇溶解，准确定容至ｌＯｍＬ，制备成浓度为０．２６ｍｇ?ｍＬ。的标准储备液，再用无水乙醇稀释配制成浓度为５２．０ ｕ ｇ?ｍＬ 。１的标准使用液，分别移取上述原花青素标准使用液１．ＯＯｍＬ，２．ＯＯｍＬ，２．５０ｍＬ，５．００ ｍＬ，１０．ＯＯｍＬ于ｌＯｍＬ容量瓶中，加入无水乙醇，定容至ｌＯｍＬ，盖塞后充分摇匀，制 得浓度分别为５．２ＩＪ ｇ?ｍ乙－‘，１０．４、１Ｊ ｇ?ｍＬ－１，１３．０ ｕ ｇ?ｍＬ～，２６．０ ｕ ｇ?ｍＬ～，５２．０ ｕ ｇ?ｍＬ－１的标准溶液，在２８０ｎｍ处以无水乙醇为空白，测吸光度Ａ。绘制玫瑰花中原花青素 的标准曲线图如图３所示。其标准曲线的回归方程为：ｈ＝Ｏ．０２３４Ｃ＋０．０１；ｒ＝Ｏ．９９９９式中：Ａ为吸光度；Ｃ为原花青素质量浓度ｔｌ ｇ?ｍＬ．１：ｒ为相关性系数图３玫瑰花中原花青素的标准曲线图１９山东中医药大学２００９届硕士学位论文３结果与讨论３．１单因素实验３。１．１超声时间的影响取５个干燥的锥形瓶，分别精密称取１．Ｏｇ玫瑰花粉末，分别加３０ｍＬ６０％乙醇于４０℃超声ｌＯｍｉｎ，１５ｍｉｎ，２０ｍｉｎ，２５ｍｉｎ，３０ｍｉｎ。结果记录如图４所示。图４超声时间对提取的影响由图４可以看出，原花青素的提取率因超声时间的不同而不同。超声时间较短 时，原花青素不易溶出，原花青素提取率随着提取时间的延长而增大，当达到一定的 提取时间时，由于玫瑰花内外有效成分达到平衡，使得提取率最高。但随着提取时间 的进一步延长，其提取率有所下降，这是由于原花青素在溶剂中长时间受热，可能使 部分酚羟基结构被破坏。３．１．２液料比的影响取５个干燥的锥形瓶，分别精密称取１．０９玫瑰花粉末，分别加入１０：１，２０：１，３０：ｌ，４０：１，５０：１的６０％的乙醇溶液，在４０℃超声２０ｒａｉｎ。结果记录如图５所示。图５液料比对提取的影响山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究液料比实际上是溶剂用量的大小。一般来说，溶剂用量越大，提取率就越大。 但是液料比过大会造成溶剂和资源的浪费，并给后续的浓缩带来困难。 由图５可知，当溶剂用量达到一定程度时（４０ｍＬ?ｇ－１），玫瑰花粉末中原花青素已 基本全部溶出，再增加溶剂用量，不但提取率变化不大，还会给后续工艺增加困难， 并造成试剂浪费，故液料比为４０：１时提取效果较好。３．１．３溶剂浓度的影响取５个干燥的锥形瓶，分别精密称取１．０９玫瑰花粉末，以４０：ｌ的液料比分别加 入３０％，４０％，５０％，６０％，７０％的乙醇溶液４０ｍＬ，４０℃超声提取２０ｍｉｎ。结果记录如图６所示。图６乙醇浓度对提取的影响原花青素为极性化合物，根据相似相溶原理，乙醇的溶解能力好，穿透细胞能 力强。通过调节乙醇和水的配比改变乙醇溶液的极性，对原花青素的提取效果有较大影响。从图６可以看出，随着乙醇浓度的升高，原花青素的提取率有先上升后下降的 趋势。随着溶剂浓度的进一步增大，其提取率有所下降，这是由于一些醇溶性杂质、 亲脂性强的成分溶出量增加，这些成分与原花青素竞争，同乙醇一水分子结合而引起。３．１．４温度的影响取５个干燥锥形瓶，分别精密称取１．０９玫瑰花粉末，加入６０％乙醇溶液４０ｍＬ， 分别在２０℃，３０。Ｃ，４０℃，５０＂Ｃ，６０℃超声２０ｍｉｎ。结果记录如图７所示。２１山东中医药大学２００９届硕士学位论文图７温度对提取的影响 一般来说，冷提的杂质少，热提的效率高。温度升高，分子运动速度加快，渗透、 扩散溶解速度加快。同时，高温可引起细胞膜结构的变化，使原花青素由玫瑰花外层 细胞转移到溶剂中。因此，随着提取温度的升高，原花青素的提取率也升高。但是温 度过高会使原花青素的结构被氧化破坏，从而导致其提取率的降低。 从图７可以看出，３０℃时原花青素的提取效果最佳，温度再升高提取率会急剧下 降。分析原因是超声的空化作用会在局部产生高温高压，若提取环境的温度又较高，会加剧原花青素的分解。 ３．２正交实验３．２．１正交实验设计 在单因素实验基础上，选取超声时间、液料比、乙醇溶液浓度、温度为考察因素， 以原花青素提取率为指标，采用正交表Ｌ。。（４５）进行正交实验，因素水平选取如表１ 所示。表１实验因素水平Ｌ，。（４５）表３．２．２最佳工艺条件的确定 在单因素实验的基础上，选取ａ（提取温度）、ｂ（液料比）、ｃ（乙醇浓度）及ｄ（超 声时间）为考察因素，以原花青素提取率为指标，采用正交表进行Ｌ。。（４５）正交实验， 实验结果如表２所示。山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究表２原花青素超声提取正交实验结果山东中医药大学２００９届硕士学位论文由表２可知，因素Ｃ（乙醇浓度）的极差最大，是考虑的主要因素，它的四个水 平所对应的提取率的平均值中，以第三水平最大，所以第三水平（乙醇浓度为６０％） 最好。因素ｂ（液料比）的极差略小于因素Ｃ（乙醇浓度），它的四个水平中，第四水平 （５０：１）最好，但第三（４０：１）、四水平（５０：１）相差不多。因素ｄ（超声时间）极 差仅次于因素Ｃ（乙醇浓度），它的四个水平中第一水平（１０ ｍｉｎ）最好。因素ａ（提 取温度）极差远小于因素Ｃ，ｂ，ｄ。以上的分析可得出以下结论：各因素对实验指标的 影响按大小次序排列分别为：ｃ（乙醇浓度）＞ｂ（液料比）＞ｄ（超声时间）＞ａ（提取温度）。 在实验设计的范围内，最好的实验方案为ａ。ｂ。Ｃ。ｄ。，即提取温度为３０。Ｃ，液料比为５０： １，６０％乙醇，超声时间ｌＯｍｉｎ。 正交实验中由于因素ｂ（液料比）中第三水平（４０：１）与第四水平（５０：１）平均 值相近，且单因素实验证明当溶剂用量达到一定程度时，玫瑰花粉末中原花青素已基 本全部溶出，再增加溶剂用量，不但提取率变化不大，还会给后续浓缩工艺增加困难， 且造成试剂浪费，故综合单因素实验和正交实验结果，提取条件采用了４０：１的液料比。因素ｄ（超声时间）中在第一水平（１０ｍｉｎ）和第二水平（２０ｍｉｎ）时，由单因素 实验中图４可知２０ｍｉｎ提取效果较好，并且原花青素提取率相差并不是很大，但超声 时间过长，原花青素会因为长时间受热而发生分解，不利于原花青素的提取。且正交 实验结果表明超声时间为第一水平（１０ｍｉｎ）时条件最佳，故综合单因素实验和正交 实验结果，为防止原花青素的分解，最大程度地保证提取充分，采用超声ｌＯｍｉｎ提取 效果较好。 单因素实验和正交实验结果均证明：因素ａ（提取温度）为３０℃，因素ｃ（乙醇浓 度）为６０％是最佳提取条件。 故综合单因素实验和正交实验结果，可以得出超声波法提取玫瑰花中原花青素的 最佳工艺为：在３０℃下，以液料比为４０：ｌ的６０％乙醇溶液，超声提取１０ ｍｉｎ。验 证实验表明，该工艺条件操作稳定，有很好的重复性。山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究第三部分玫瑰花原花青素纯化大孔树脂是近十年发展起来的一类有机高分子聚合物吸附剂。由于它具有良好的 网状结构和很高的比表面积，可以通过物理吸附从水溶液中有选择的吸附有机物质， 从而达到分离提纯的目的汹３。其具有选择性好、机械强度高、再生处理方便、吸附 速度快、分离效果好、操作简便等优点，广泛用于天然产物的提取洳’州０１１。赵平等 人ｎ嘲研究发现ＡＢ一８大孔吸附树脂对原花青素有较好的吸附效果。该方法不仅分离 纯化效果好，而且样品前处理和大孔树脂的前处理比较简单、省时、树脂价格低廉、 可行性好，能满足大量生产的需要［１０３］ｏ本实验旨在找到一种ＡＢ一８纯化玫瑰花原花青 素的最佳工艺条件，为原花青素的纯化提供一种更好的方法 １材料、试剂与仪器 １．１材料与试剂 原花青素化学对照品（质量分数＞９５％）（天津尖峰天然产物研究开发有限公司）； 玫瑰花购自山东平阴玫瑰花种植园（经本校生药系教研室彭艳丽教授鉴定为蔷薇科植 物玫瑰（ＲｏｓａｒｕｇｏｓａＴｈｕｍｂ）的干燥花蕾）；ＡＢ－８大孔吸附树脂（天津市光复精细化学工业研究所）；其它化学试剂均为分析纯。１．２仪器ＵＶ－７５２Ｎ紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；国华恒温震荡水 浴（中国深圳国华仪器制造有限公司）；ＲＥ－５２型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；ＳａｒｔｏｒｉｕｓＣＰ２２５Ｄ型电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；ＫＱ－２５０Ｅ型超声振荡清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）。 ２实验方法 ２．１绘制标准曲线精密称取２．６ｍｇ原花青素化学对照品，用无水乙醇溶解，准确定容至ｌＯｍＬ，制成浓度０．２６ｍｇ?ｍＬｌ的标准储备液，再用无水乙醇稀释配制成浓度５２．０ｕｇ?ｍＬ。１的标准使用液，分别移取上述原花青素标准使用液１．ＯＯｍＬ、２．ＯＯｍＬ、２．５０ｍＬ、５．ＯＯｍＬ、１０．ＯＯｍＬ于１０ ｍＬ容量瓶中，加入无水乙醇，定容至ｌＯｍＬ，盖塞后充分摇匀，制得浓度分另ＩＪ为５．２ ｌＩｇ?ｍＬ～、１０．４ｕｇ?ｍＬ－１、１３．０ｕｇ?ｍＬ一、２６．０｜ｌ ｇ?ｍＬ～、５２．０１１ｇ?ｍＬ＿的标准溶液，在２８０ｎｍ处以无水乙醇为空白，测吸光度。得标准曲线的回归方程山东中医药大学２００９届硕士学位论文为：ｈ＝Ｏ．０２３４Ｃ＋０．０１ｒ＝Ｏ．９９９９，具有良好的线性关系。式中：Ａ为吸光度；Ｃ为原花青素质量浓度（ｕ ｇ?ｍＬｑ）；ｒ为相关性系数。如图８：图８原花青素的标准曲线图２．２玫瑰花原花青素样品液制备及原花青素浓度的测定 精密称量玫瑰花粉末１０．Ｏｇ，用６０％乙醇对玫瑰花粉末以液料比为４０：１浸提，３ Ｏ。Ｃ超声振荡ｌＯｍｉｎ，过滤，合并滤液，低温减压浓缩蒸干，加蒸馏水定容至５００ｍＬ 容量瓶既得样品液，冷藏，避光，备用。将样品精密移取ｌＩＩｌＬ定容至５０ｍＬ容量瓶， 再精密移取１ＩＩｌＬ定容至５ｍＬ容量瓶测吸光度Ａ，带入标准曲线方程计算样品液原花青 素含量。 ２．３大孔树脂的预处理 将一定量的树脂放入烧杯中，以９５％的乙醇溶剂浸泡２４ｈ后，湿法装柱，用９５％ 乙醇洗脱，控制流速，洗至流出液与水ｌ：２混合不产生浑浊后，改用大量蒸馏水冲 洗，洗脱至乙醇无味为止，水浸泡备用。 ２．４静态吸附一解吸条件研究 树脂对原花青素的吸附性能与树脂的结构、原花青素的性质、溶剂及操作条件等 多种因素有关，通过改变洗脱液浓度、样品ｐＨ、上样量等，选择出一种吸附量大、 解吸率高、选择性强、吸附速度快的工艺作为纯化方法。 ２．４．１饱和吸附量的测定 准确称取经预处理的树脂１．Ｏｇ ３份，分别置于３个ｌＯＯｍＬ具塞磨口三角瓶中， 精密加入２０ｍＬ玫瑰花原花青素提取液，２５℃下恒温震荡１２ｈ，至吸附平衡，过滤。将 滤液用蒸馏水定容至５０ｍＬ容量瓶，测定吸光度Ａ，计算饱和吸附量。 饱和吸附量＝［（初始浓度一吸附后浓度）×吸附液体积］／树脂量（ｍｇ?ｇ叫干树脂） 经计算，饱和吸附量的平均值为８９．５２ｍｇ?ｇ。１干树脂。山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究２．４．２洗脱液浓度对树脂吸附量的影响 精密称量经过预处理的树脂１．０９ ９份，分别置于ｌＯＯｍＬ具塞磨口锥形瓶中，精 密移取２０ｒａｌ玫瑰花原花青素提取液，２５。Ｃ恒温震荡１２ｈ，过滤，测定吸光度Ａ，带入标准曲线方程计算原花青素吸附后浓度，并计算吸附率。 吸附率＝（Ｃｏ－Ｃ。）／ｃｏ×１００９６其中，Ｃｏ为初始浓度（ｍｇ?ｍＬｌ），Ｃ。为剩余浓度（ｍｇ?ＩＩＩＬｌ）． 向已达到吸附平衡的树脂中分别加入浓度为１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７ ０９６、８０ｎ，６、９５％７，醇溶液，２５。Ｃ恒温震荡４ｈ，过滤，测定吸光度，根据标准曲线方程计 算残余液原花青素浓度和解吸率。解吸率＝Ｃ：／（Ｃｏ－Ｃ。）Ｘ １００％其中，Ｃ。为洗脱液浓度（ｍｇ?ｍＬ－１），Ｃｏ、Ｃ。为吸附前后溶液浓度（ｍｇ?ｍＬ叫）． 结果如图９所示：图９解吸液浓度对解吸率影响曲线 由图表可知，随着解吸液浓度升高，解吸率有升高趋势。从经济角度考虑，最佳洗脱液浓度为４０％。２．４．３ｐＨ对树脂吸附量的影响’精密称取已处理好的大孔树脂１９ ５份，分别置于５个ｌＯＯｍＬ具塞磨口三角瓶中，分别精密加入ｐＨ为２、３、４、５、６的样品液各２０ｍＬ，按２．４．１下同法震荡，测定吸 光度，计算吸附率，公式同上。分离树脂，晾干，各加入浓度为４０％乙醇２０ｍＬ，测吸光度，计算解吸率，方法、公式同２．４．２。结果如图１０所示：山东中医药大学２００９届硕士学位论文图１０ｐＨ对树脂解吸率的影响由图１０可知，当样品液ｐＨ为４时，大孔树脂吸附性能最好。 ２．４．４上样量的选择精密称量处理好的ＡＢ一８大孔树脂１．Ｏｇ ４份，分别置于４个ｌＯＯｍＬ三角瓶中，分别加入精密量取的５ｍＬ、ｌＯｍＬ、１５ｍＬ、２０ｒａＬ样品液。测定吸光度，计算吸附率和解吸 率。方法、公式２．４．２。结果如图１１所示：图１１上样量对大孔树脂吸附性能的影响由图表可知，当树脂量与上样量之比为１：１０时，Ａ８―８大孔树脂的吸附和解吸性能最好。 ２．５动态解吸性能研究 解吸是吸附的逆过程，向吸附体系中加入对吸附质有一定溶解度的溶剂，吸附剂 与吸附质之间的作用力会改变，当溶剂对吸附质的作用力大于原体系的作用力时，原 来的吸附就会崩溃，吸附质由吸附剂进入溶剂，称为解吸过程。本试验通过测定原花 青素含量考察流速、洗脱剂的体积等因素对树脂洗脱性能的影响，确定最佳洗脱工艺 条件。 ２．５．１洗脱流速的选择 移取等量玫瑰花原花青素样品液３份，分别缓缓的加入３支经平行处理过的ＡＢ―山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究８大孔树脂的层析柱（２０ ｃｍ＊ｌｃｍ）中，待吸附饱和后，先用３ＢＶ蒸馏水洗脱，后以３ ＢＶ４０９６乙醇为洗脱剂，分别以０．５、１．０和２．ＯｍＬ?ｍｉｎｌ的流速进行洗脱。收集洗脱液， 用蒸馏水定容至５０ｉＬ容量瓶，精密移取１ｍＬ定容至５ｍＬ容量瓶，测定吸光度，计算 收率。 收率＝（洗脱溶液体积×洗脱液中原花青素浓度）／（样品溶液体积×样品溶液 中原花青素浓度）×１００％ 绘制洗脱流速对ＡＢ一８大孔树脂对玫瑰花原花青素的洗脱性能影响的曲线。结果如图１２所示：图１２洗脱液流速对树脂吸附性能的影响曲线 由图１２可知，当洗脱液流速为ｌｍＬ?ｍｉｎ叫时，ＡＢ一８大孔树脂洗脱效果最好。 ２．５．２洗脱液体积的选择 向３支经过平行预处理过的ＡＢ－８大孔树脂层析柱（２０ｃｍ＊ｌｃｍ）中，分别缓缓加入 ３份原花青素样品液，吸附饱和后，先用３ＢＹ的蒸馏水洗脱，再分别用２ＢＶ、３ＢＹ、４ ＢＶ浓度为４０％乙醇洗脱，收集洗脱液，如２．２．５．１定容。测定吸光度，计算原花青素 浓度。绘制洗脱液体积对ＡＢ一８树脂对玫瑰花原花青素洗脱性能影响的曲线。其结果 如图１３所示：图１３洗脱液体积对树脂吸附性能的影响曲线山东中医药大学２００９届硕士学位论文由图１３可知，当洗脱液体积为３ＢＶ时，大孔树脂的吸附性能最佳。 ３结果与讨论 ３．１洗脱液浓度的选择 如图９所示，随着乙醇浓度增加，解吸率呈上升趋势。分析其原因：原花青素是 不同聚合度的多种异构体组成的混合物，各组分的结构与极性均存在差异，为保证解 吸效果较好，试验采用不同浓度的乙醇洗脱。原花青素异构体的极性不同，与树脂的 吸附作用力也不同。ＡＢ－８属于弱极性树脂，由“相似相溶＂原理，原花青素极性越 大，与树脂之间的吸附作用力越强。由原花青素的结构知，随聚合度增加，分子极性 增强，体积增大，与树脂的作用力增强，表现在解吸特性上则需要更高浓度的乙醇才 能洗脱。理论上来讲，提高乙醇浓度，可以增加大孔树脂解吸率。可选择３０％＂－＇６０％ 的乙醇进行洗脱，从经济角度考虑，故本试验采用的最佳洗脱浓度是４０％。３．２ｐＨ的选择结果如图１０所示，提取液ｐＨ值对树脂的吸附有较大的影响，在ｐＨ值为４，树 脂的吸附率和解吸率同时达到最大，为最佳ｐＨ。 ３．３上样量的选择如图１１所示，当树脂量与上样量之比为１：１０时，大孔树脂的吸附率和解吸率同时达到最大，即为最佳上样量。 ３．４洗脱流速的选择 流速不同，解吸效果不同，流速过小，解吸时间延长，且被洗脱的原花青素在随 流动相运动时，可能被重新吸附，在两相间建立新的吸附平衡，减少洗脱量；流速过 大，被树脂吸附的原花青素尚未完全解吸时，解吸剂已流出，导致洗脱量降低。由图 １２结果所示以ｌｍＬ?ｍｉｎ＿流速洗脱效果最好。 ３．５洗脱液体积的选择 如图１３所示，当解吸液体积为３ＢＶ时，收率达到最大。分析其原因，洗脱液体 积过小时，有效成分不能全部洗脱；当洗脱液体积过大时，会洗脱出部分杂质。综上 考虑，最佳洗脱体积为３ＢＶ。 通过对ＡＢ－８大孔树脂静态和动态的吸附一解吸试验考察得出分离纯化玫瑰花原 花青素的最佳工艺为：树脂量与上样量之比为１：１０，ｐＨ为４，以３ＢＶ４０％乙醇以ｌｍＬ?ｍ ｉｎｌ流速洗脱。山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究第四部分玫瑰花原花青素Ｂ２的含量测定《中华人民共和国药典》２００５版中只对玫瑰花的浸出物、水分、总灰分等常规 实验做了规定，随着玫瑰花新的药理作用的研究报道，玫瑰花中原花青素类物质的临 床试验研究越来越多，已经引起了人们的广泛关注。其中二聚体在各类原花青素中分 布最广，抗氧化活性最强，是最重要的一类。二聚体因２个单体的构象或缩合键位不 同，有多种异构体，现已鉴定的８种异构体命名为Ｂ，～Ｂ８，Ｂ，～Ｂ４由Ｃ。一Ｃ。键合，Ｂ５～ Ｂ８由Ｃ４一Ｃ。键合。在８种异构体中原花青素Ｂ。是活性最强的一个二聚体汹１。故本实验 运用ＨＰＬＣ的方法对玫瑰花原花青素Ｂ。进行了定量分析，为玫瑰花质量标准的制定提 供一定的参考依据。 ｌ实验仪器和材料１．１仪器ＲＥ一５２ＡＡ旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；ＵＶ－７５２Ｎ紫外分光光度计（上海精 密科学仪器有限公司）；Ａｇｉｌｅｎｔｌｌ００高效液相色谱仪；色谱柱：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ５ｕ ＬｕｎａＣ；。（２）ＩＯＯＡ（２５０＊４．６０ｍｍ）；ＡＢ一８型大孔树脂（天津市光复精细化学工业研究所）；电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）。１．２材料玫瑰花购自山东平阴玫瑰花种植园（经本校生药系教研室彭艳丽教授鉴定为蔷薇科植物玫瑰（ＲｏｓａｒｕｇｏｓａＴｈｕｍｂ）的干燥花蕾）；原花青素Ｂ：标准品（质量分数＞９５％）（天津尖峰天然产物开发有限公司）；甲醇（一级色谱纯）（天津市四友精细化学品有 限公司）；实验用水为娃哈哈纯净水；其他化学试剂均为分析纯。 ２色谱条件色谱柱：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａ ５ｕＣ１８（２）Ｉ ＯＯＡ（２５０＊４．６０ｍｍ）；流动相：２％冰醋酸水溶液一甲醇，梯度洗脱，洗脱时间程序见表３进样量：２０ｕＬ检测波长：２８０ｎｍ 流速：１ＩｎＬ?ｍｉｎ。１ 柱温：３０℃３ｌ山东中医药大学２００９届硕士学位论文表３线性梯度洗脱的时间程序３实验方法 ３．１对照品溶液的绘制 精密称取原花青素Ｂ。标准品５．１４ｍｇ，置ｌＯｍＬ的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 配制成５１４ＩＩｇ?ｍＬｌ的原花青素Ｂ：的标准储备液，再精密吸取ＩｍＬ、１．５ｍＬ、２ｍＬ、２．ｇ?ｍＬ一、７５ｍＬ、３ｍＬ的原花青素Ｂ。的标准储备液，用甲醇稀释到ｌＯｍＬ，配成５１．４｜ｌ７．１ ｐ ｇ?ｍＬ～、１０２．８ｌ－ｔｇ?ｍＬ－。、１２８．５ ｌ－ｔ ｇ?ｎｌＬ一、１５４．２ｌｉｇ?ｍＬ。１的原花青素Ｂ２的标准溶液，用装有Ｏ．２２ 备进样样品的制备。 ３．２样品溶液的制备ｐｍ微孔滤膜的滤器进行过滤，弃去初滤液，取２０ ｐ Ｌ续滤液以精密称取１．Ｏｇ玫瑰花粉末，以６０％的乙醇作为溶剂，以４０：１的液料比，在３０ ℃条件下超声提取ｌＯｍｉｎ，抽滤，低温减压蒸发浓缩，浓缩液溶于蒸馏水得原花青素 Ｂ：粗提物。然后在处理好的ＡＢ－８型大孔树脂的层析柱（２０ｃｍ＊ｌｃｍ）上样，上样量为 ２５ｍＬ，上样后先用３ＢＶ的蒸馏水洗至洗脱液无色，再用３ＢＶ４０％的乙醇洗脱，洗脱速 度为ｌｍＬ?ｍｉｎ一，收集洗脱液，将洗脱液低温旋转蒸发浓缩，将洗脱液蒸干后用甲醇 稀释溶解定容到ｌＯｍＬ，制成经大孔树脂吸附纯化后的玫瑰花原花青素Ｂ。的提取物。 用装有０．２２待测。ｕｍ微孔滤膜的滤器进行过滤，弃去初滤液，取２０ ｕ Ｌ续滤液以备进样，３．３含量测定 ３．３．１标准曲线的制备 取上述标准系列溶液各２０ｐＬ进样，测得峰面积，以原花青素Ｂ。标准品的峰面积（Ｙ）对于浓度（Ｘ）进行回归，得标准曲线为：Ｙ＝５．３２７７Ｘ＋５．９６１３，Ｒ２＝Ｏ．９９９８。在５１．４ １．１ ｇ?ｍＬ～～１５４．２ ｔｉ ｇ?ｍＬ。１范围内，对照品浓度与峰面积呈良好线性关系制得原花青素Ｂ：标准曲线见下图１４所示：３２山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究图１４原花青素Ｂ２标准曲线图 ３．３．２精密度试验取上述标准溶液（１０２．８测定结果表明精密度良好。Ｉｌｇ?ｍＬ。１），重复进样５次，测得其峰面积，ＲＳＤ＝Ｏ．２９％。表４原花青素Ｂ２标准品精密度试验３．３．３重复性试验取制备好的样品溶液的续滤液２０ ｐ Ｌ连续进样５次，测得峰面积，ＲＳＤ＝Ｉ．４７％。 测得结果表明重复性良好。 表５原花青素Ｂ。样品重复性试验３．３．４稳定性试验取上述对照品溶液（１０２．８ｕｇ?ｍＬ。１），分别于０，２，４，８，１２ ｈ，各测定１次，计算其峰面积的ＲＳＤ（ｎ＝５）为０．４９％。结果表明对照品在１２ ｈ内稳定性较好。３３山东中医药大学２００９届硕士学位论文表６原花青素Ｂ。标准品稳定性试验３．３．５回收率 先准确加入已知浓度原花青素Ｂ。标准品２．５ｍＬ，再准确加入相同浓度的原花青素Ｂ２标准品２ｍＬ，甲醇定容至ｌＯｍＬ，用装有０．２２ 液，取２０ｐｕｍ微孔滤膜的滤器进行过滤，弃去初滤ｌ续滤液以备进样，测得峰面积，代入回归方程，求得相对应的原花青素Ｂ。的浓度。按照以下公式计算得到回收率： 回收率＝（测定平均值一空白值）／加入量＊１００％ 表７玫瑰花原花青素Ｂ：的回收率浓度／ｕｇ?ｍＬ。回收率／％９８．３５１０２．８３．３．６最低检出限 取浓度为２５．７ ＩＩ ｇ?ｍＬｌ的原花青素Ｂ。标准溶液，稀释成浓度为１２．８５ ｕ ｇ?ｍＬｌ 的稀释液，再稀释成为６．４２５ｐｇ?ｍＬｌ的标准溶液，再用同样的方法稀释成３．２１２ Ｉｌｇ?ｍＬ。１的标准溶液。用装有０．２２ ｕ ｍ微孔滤膜的滤器进行过滤，弃去初滤液，取２０｜ｌＬ续滤液进样，测得峰面积，代入回归方程，测得四种不同浓度的原花青素Ｂ。标准ｕ ｇ?ｍＬ一。溶液的浓度，最低检出限为３．２１２３．３．７样品含量测定各样品按３．３．２项下制备成供试液，按３．２色谱条件下测定其峰面积，利用标准曲 线计算样品中原花青素Ｂ。的含量，结果见表８及图１５。其液相图见附录（标准品、甲 醇、平阴一号、平阴二号、平阴三号、平阴四号、平阴十一号、平阴十二号、丰花、 传统、紫枝、大红花、单县分别对应的图谱为附图ｌ、附图２、附图３、附图４、附图５、附图６、附图７、附图８、附图９、附图１０、附图１ １、附图１２、附图１３）。山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究．图１５玫瑰花样品原花青素Ｂ２含量比较图通过实验得出山东不同产地的玫瑰花原花青素Ｂ。的含量是有差别的，其中丰花玫 瑰花含量最高，其次为传统玫瑰花，紫枝玫瑰花含量最少，平阴一号、二号、三号、四 号、十一号、十二号均属玫瑰系列的杂交品种，因此含量差别不是很大，而大红花和单县的玫瑰花可能由于地域环境、栽培等因素不同，含量不是很高。３５山东中医药大学２００９届硕士学位论文第五部分结论Ｉ本课题通过单因素实验和正交实验得到从玫瑰花中提取原花青素的最佳条件为：提 取温度为３０℃，液料比４０：ｌ，６０％乙醇溶液，超声提取ｌＯｍｉｎ。验证实验表明，该工艺条件操作稳定，有很好的重复性。２为了得到玫瑰花原花青素提取物的纯品，选用了ＡＢ一８大孔树脂采用静态和动态的 吸附一解吸试验，利用紫外一可见分光光度计测量玫瑰花原花青素的含量，研究不同 的工艺条件对原花青素纯化的影响。得出ｐＨ为４时，树脂吸附能力达到最大。采用３ＢＶ４０％乙醇以ＩｍＬ?ｍｉｎ。流速洗脱可获得较纯的玫瑰花原花青素。本实验只是初步探索了玫瑰花原花青素的纯化方法，为下一步采用正交试验优选ＡＢ一８大孔树脂的最 佳纯化方法提供了一定的参考依据。 ３本实验最后运用了ＨＰＬＣ的方法对玫瑰花原花青素提取物进行了定性和定量分析。 分析结果显示：玫瑰花原花青素提取物中存在原花青素Ｂ：这一成分，且分析了山东 产地的１１个品种的玫瑰花含量，其中丰花的含量最高，紫枝的含量最低。该分析方 法的方法学研究结果为：标准曲线为Ｙ＝５．３２７７Ｘ＋５．９６１３，Ｒ２＝Ｏ．９９９８，在标准品浓度为５１．４ ｕｇ?ｍＬ～＇－－－１５４．２ Ｉｌｐｇ?ｍＬｌ范围内，线性关系良好。回收率为４８．３５％（ｎ＝５）。最低检出限为：３．２１２ｇ?ｍＬ～，结果显示该方法适合用于分析玫瑰花原花青素提取物。４由于时间和课题经费的限制，本课题只考察了山东不同产地玫瑰花品种的原花青素Ｂ。的质量标准，为今后考察全国范围内的玫瑰花原花青素Ｂ。的质量标准奠定了理 论依据和实验参考资料。山东玫瑰花原花青素含量测定及质量标准研究第六部分结语原花青素历经４０多年的研究、开发，其优越的抗氧化活性已得到了人们的首肯， 在改善微循环和治疗眼疾方面已获得重大进展，并在药物和化妆品等领域得到了广泛 应用。其资源丰富，疗效确切，副作用小的特点，不仅使它在欧洲、日本备受青睐， 近年来又风靡美国，预示了原花青素医疗应用等方面的广阔发展前景。在法国，用葡 萄籽原花青素制成的专利产品用于治疗微循环疾病，包括眼睛与外周毛细血管通透性 疾病及静脉与淋巴功能不全。法国的Ｂｏｎｎａｕｒｅ等发明了以原花青素低聚体或单体为 活性成分（≥ｌ％）的治疗牙周病的制剂并获专利保护。法国Ｓａｎｏｆｉ用葡萄籽原花青 素与大豆卵磷脂制成复合物，用作血管保护剂和抗炎剂。原花青素在化妆品领域具有 抗皱、美白、保湿和抗辐射等功效。法国己开发出用原花青素低聚体制成的脂质体微 囊晚霜、发乳和漱口水。为了使活性成分便于通过皮肤角质层，意大利的Ｉｎｄｅｎａ公 司用５年的时间研制成功了以磷脂（天然磷脂或合成磷脂）为载体的功能化妆品，商 品名为Ｐｈｙｔｏｓｏｍｅ，此产品含５％银杏原花青素二聚体，用于皮肤消炎和改善微循环。 经１８名健康受试者试验（这些人因紫外线照射已出现皮肤炎症和红斑），表明该化妆 品有较好的保护紫外线伤害作用。１９９０年，日本Ｙａｍａａｋｏｓｈ研制了含１％原花青素低 聚体的可使皮肤亮洁的油性化妆品。我国对原花青素的开发起步并不晚，从１９８６年 起，开始加入了世界开发原花青素的行列。我国的葡萄、山楂和松树等资源都很丰富， 为开发利用原花青素提供了便利。因此，若能充分开发植物中的原花青素资源，并结 合我国传统中医药技术，物尽其用，将会大大促进原花青素在药品、保健食品和化妆 品的应用。所以相信玫瑰花原花青素将会有很大的市场需求，可以应用于很多方面， 值得去进一步开发利用。 现代对玫瑰其价值进行了积极的开发，以精油提取、玫瑰食用较为成熟。国外在玫 瑰精油的提取、精油香型标准制定上已经走在了我国的前面。精油是各种化妆品提高 品质的重要添加剂，在这一领域我国的平阴玫瑰、苦水玫瑰等都存在着巨大的潜在市 场：在食用方面，玫瑰花广泛用于腌制玫瑰酱，泡制玫瑰露，窖制玫瑰花茶，酿制玫瑰酒 等，都有极大的经济价值。目前，对玫瑰花的研究主要集中在香料和食品色素方面， 而在医疗保健方面研究得相对较少。有人曾对其药理药效进行了进一步的深入研究分 析，除了原有的药效外，发