专利名称：化妆品中红霉素的高效液相色谱检测方法
本发明是一项利用高效液相色谱仪检测化妆品中红霉素的新技术，尤其适用f化妆品中微量抗生素-红霉素的定性及定量分析。
红霉素(Erythromydn)是一种碱性抗生素，为大环内酯类抗菌药物,作为 一种广谱高效的抗菌药物被广 泛应用到药品、饲料、和化妆品中。红霉素对革兰阳性菌，如葡萄球菌、化脓性链球菌、绿色链球菌等有 较强的抑制作用；对革兰阴性菌，如淋球菌、螺旋杆菌、百日咳杆菌、以及流感嗜血杆菌也有相当的抑制 作用；此外，对支原体、放线菌、螺旋体、立克次体、衣原体、少数分枝杆菌和阿米巴原虫都有抑制作用。 由于其广谱高效的抑菌作用，红霉素被一些化妆品生产厂家，添加到祛痘类产品以达到消炎、祛瘦、除螨 及抗粉刺的0的。但这种药物同时也存在着很多不良反应，《中国药典》规定红霉素针剂仅能静脉内给药， 严禁肌肉注射。若药液不慎漏入皮下或肌肉组织，轻者可引起局部剧烈的疼痛刺激，严重者可导致大片皮 肤坏死、粘连，愈合后常形成疤痕；此外还可阻挠性激素类的肠肝循环；过讨的红霉素能引起腹泻、恶心、 呕吐、胃绞痛、口舌疼痛等，更严重的是长期接触此类药物会导致许多病原微生物产生抗药性，不利于疾 病的治疗。冈此，为保护化妆品消费者的健康安全，建立灵敏、准确、快速的化妆品中红霉素的检测方法 是十分紧迫和必要的。
据各种文献报道，目前药品中红霉素的检测方法主要有抗生素微生物检定法、紫外分光光度法、液相 色谱法、薄层色谱法、化学发光分析、二阶导数差示脉冲极谱法。抗生素微生物检定法是《中国药典》(2000 年版)规定的检铡药品中红霉素的方法，该方法周期长，操作繁琐，影响因素较多，精密度低。紫外分光 光度法是比较经典的方法，但灵敏度不高，专属性差，不适于成分复杂样品的分析。薄层色谱法灵敏度高、 选择性好，但重复性差，且检测步骤繁琐。化学发光分析、二阶导数差示脉冲极谱法虽然检测灵敏度高， 但存在着仪器昂贵，设备不易普及等因素。高效液相色谱方法是g前检测红霉素药品较常用的方法，但也 仅仅局限于各种红霉素药品制剂的含量检测，而化妆品、饲料、肉类中的红霉素含量的检测还没有出台相 关的标准或方法，由丁药品组分较少，基质简单，千扰肉素较少，且样品预处理操作简便，目标检测物损 失小，因此红霉素药品的含量易于检测。与药品不同，化妆品种类繁多，基质复杂，各成分的理化性质差 别较大，干扰闵素较多，尤其是红霉素作为化妆品禁用成分添加到化妆品中，其含量较低，以上所述各种 方法很难准确的检测出化妆品中微量的红霉素成分，而且使用高效液相色谱检测化妆品中的红霉素的方法 还没有文献报道。针对以上现有技术的不足，我们设计了一种用高效液相色谱方法检测化妆品中红霉素的 方法，该方法专属性好，灵敏度高，且操作简单。

本发明的目的是提供一种检测化妆品中红霉素的分析方法，该项技术利用高效液相色谱仪不仅可以对
化妆品中的红霉素进行准确的定性分析，而且还可以进行微量的定量分析。
本发明是用无水甲醇或乙腈提取化妆品中的红霉素，经超声萃取、离心、过滤等一系列操作，滤除阔 体杂质，直至滤液澄清，取制备好的样液上机，用磷酸二氢铵一乙腈缓冲液或磷酸二氢铵一甲醇缓冲液进 行洗脱分离，在1恥-380nm波长下采集数据进行分析。所用高效液相色谱仪的主要配置包括十八烷基硅踪 键合硅胶为填充剂的反相色谱柱C8柱或C18杆:，检测器为紫外检测器或二极管阵列检测器。
本发明方法的主要分析步骤如下
称取一定量的化妆品(乳、膏、霜或水剂)于10ml刻度离心管中，加入3—7ml无水甲醇或乙腈，涡 旋混匀使基质充分分散，定容至刻度，再超声提取15 — 30min，将提取液转移至E卯endorf管中， 12000rpm/niin离心5min，如果有必要可以再用0. 45 n m滤膜过滤备用。
(1) 色谱柱以十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂的反相色谱柱C8或C18柏-:;
(2) 检测器紫外检测器或二极管阵列检测器；
(3) 检测波长选用1恥-380nm波长作为检测波长；
合，峰形对称，分离度好(R〉1.5)。
用红霉素标准物质配制成一定梯度浓度的标准液，20nl体积进样，按外标法，以峰面积一进样浓度 作线性冋归，得出线性回归方程，利用该方程和样品中红霉素的峰面积计算样品中的红霉素含量。 4样品检测
(1) 按照1中的方法进行样品预处理，取处理好的样品20nl进样；然后再取适当浓度的红霉素标准 溶液2(^1进样。
(2) 依照2中的色谱条件进行检测，分别得到样品的色谱图和红霉素标准品的色谱图；将样品的色
谱图和标准品的色谱图进行比较，样品色谱图中与标准品保留时间相近(误差范围:标准品保留时间土0.5 分钟)的色谱峰即为相应的红霉素成分，为了确保检测结果的准确性，可对初步确定的色谱峰进行光谱分 析(光谱分析仅适用于二极管阵列检测器)，若与红霉素标准品的最大吸收波长及光谱图特征相似，可进 一步确定样品中的红霉素成分。
(3) 将样品中红霉素的色谱峰面积带入3中的线性回归方程中，计算样品中红霉素的浓度。 由于化妆品种类繁多、基质复杂，不能完全排除干扰成分与红霉素在同一时间出峰的可能。采用二极
管阵列检测器可获得红霉素的紫外吸收光谱图，与标准品的光谱图对照，通过分析二者的最大吸收波长和 光谱图特征，可进一步进行确认。
本发明的分析方法简便、快捷，灵敏度高，选择性、重复性好，适用于任何裔霜剂、乳剂、及水剂等
各种剂型的化妆品中红霉素的检测。

图2红霉素标准品色谱图
图4红霉素t示准品光谱图
下面结合具体实施实例对本发明作进一步的阐述，但不限制本发明 1材料 1.1仪器
乙腈(色谱纯)、无水甲醇(色谱纯)为Merck公司产品；磷酸二氢铵(分析纯)、二乙胺(分析纯) 为天津科密欧试剂厂产品；超纯水由Milli-Q system制取。
红霉素标准品购于中国生物制品检定所，批号为215。 供试样品为碧颜抑痘精华、雪肌柔肤水(不含红霉素)。
精密称取40.00mg红霉素标准品置于lOml容量瓶中，加少许无水甲醇溶解，并用甲醇定容至刻度， 摇匀，配制成浓度为4mg/ml的标准液作为储备液，于4i:冰箱中存放备用。 2方法
流动相采用0. lmol/L磷酸二氢铵溶液(用二乙胺调节pH值为5. 90):乙腈=60: 40缓冲溶液作
为流动相。磷酸二氢铵溶液一乙腈缓冲体系的基线噪音比磷酸二氢铵溶液一甲醇的基线噪音
小，且在pH值为5.恥时峰性对称，分离度好。 检测波长210咖。经190-380波长扫描，红霉素在197nm处有最大吸收，考虑到200 nm接近末端吸
收,溶剂吸收较强,干扰较大，而210 ran波长处溶剂吸收相对较小，故选择210 nm作为检测波长。
称取l.OOg的化妆品(碧颜抑痘精华)于10ml刻度离心管中，加入5ml无水甲醇，涡旋混匀使基质 充分分散，再超声提取20min,将提取液转移至Eppendorf管中，12000rpm/m] n离心5min，如果存必要可 以再用0. 45 !i m滤膜过滤，制成供试样品溶液。
用无水甲醇将1.3中红霉素储备液稀释成如下梯度浓度的标准系列0. 1mg/ml、 0.2rag/ml、 0.4mg/ml、 0. 6呢/ml、 0. 8rag/ral、 1. 0mg/ni1、 2. Omg/ml，取各浓度的标准溶液20nl进样.按2. 1的色谱条件进行测定， 得到各浓度的峰面积，作峰面积一浓度标准曲线，得到其线性回归方程(由高效液相色谱T.作站完成计算 工作)。
取浓度为0. 4mg/ml的红霉素标准溶液，每次进样20nl，连续进样5次，按2. 1的色谱条件进行测定， 记录峰面积，计算精密度。 2. 5稳定性
取浓度为0.4mg/ni1的红霉素标准溶液，在室温下放置，分别在0h、 5. 5h、 8h、 14h、 25h进样，每次 进样20nl，按2. 1的色谱条件进行测定，比较测定结果的稳定性。 2. 6重现性
取碧颜抑痘精华样品1. OOg，按2. 2中的方法处理样品，共做5个平行样，按2. 1的色谱条件进行测 定，计算相对标准偏差，比较重现性。 2. 7加样回收率
精密称取不含红霉素的雪肌柔肤水样品5份各1. 00克，每份加入2. 0mg/ni1的红霉素标准溶液各2ml， 按2. 2的样品预处理方法进行样品预处理，在2.1的色谱条件下进行测定，计算红霉素的回收率。 2. 8样品检测
取20nl供试液进样，利用2.1中的色谱条件进行检测，获得样品的色谱阁(图O和光谱图(图3); 再取1.3中的红霉素标准品储备液稀释至为0.60mg/ml浓度，20^1进样，问样检测条件下，得到红霉素标 准品的色谱图(图2)和光谱图(图4)。
峰面积计算相对标准偏差为2.74%，说明该方法具有良好的重现性；加标问收率试验的5份平行样品的标 准品回收量和回收率见表1,由此计算得到的相对标准偏差为1. 80% 。
由红霉素标准品的色谱图(图2)可以看出，利用2. 1中的色谱检测条件得到红霉素标准品的保留时 间为5.089min，将样品的色谱图(图l)和标准品的色谱图(图2)进行比较，可见样品色谱图中在5. 127min 处有一色谱峰与红霉素标准品色谱峰的保留时间5.089min相近，误差在土O. 5分钟范闱之内，因此可以初 步确定样品色谱图中5. 127niin处的色谱峰为红霉素，该峰面积为239. 79056mm、将样品色谱图中5. 127min 处峰的光谱图(图3)与红霉素标准品的光谱图(图4)进行对比，可以发现样品的光谱图与标准品的光 谱图的最大吸收波长及光谱图特征均相似，可进一步确定样品中保留时间为5. 127min的组分为红霉素。
将样品中红霉素的色谱峰面积239. 79056咖2代入线性回归方程中，即可得到样品处理液中红霉素的含 量(由高效液相色谱工作站完成计算工作)，经计算可得碧颜抑痘精华样品中红霉素的含量为4. 73mg/g。
该发明具有高分辨率，高灵敏度，重现性、选择性好且样品预处理方法简单的特点，适宜化妆品中红 霉素的定性、定量分析。
本发明以大量实验和理论分析，找到了一种利用高效液相色谱仪检测4t妆品中红霉素的分析方法，填 补了化妆品中红霉素液相色谱分析方面的研究空白。
1 一种化妆品中红霉素的高效液相色谱检测方法，其特征在于采用紫外检测器或二极管阵列检测器，使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18柱或C8柱，以磷酸二氢铵-乙腈缓冲溶液或磷酸二氢铵-甲醇为流动相，采用190-380nm的检测波长，样品预处理采用无水甲醇或乙腈溶解样品，超声萃取，0.45μm滤膜过滤，以外标法定量计算样品中红霉素浓度。
2.根据权利要求1所述的化妆品中红霉素的高效液相色谱检测方法，其特征在于采用紫外检测器或二 极管阵列检测器。
3.根据权利要求1所述的化妆品中红霉素的高效液相色谱检测方法，其特征在于采用十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂的C18柱或C8柱。
5.根据权利要求1所述的化妆品中红霉素的高效液相色谱检测方法，其特征在丁采用190-380nm波 长进行检测，最佳检测波长为210tim。
6.根据权利要求1所述的化妆品中红霉素的高效液相色谱检测方法，其特征在于所用流速为0.5-1.5ml/min，柱温为20-30'C，进样体积为20^1;其中最佳流速为lml/min，最佳柱温为25。C。
7.根据权利要求1所述的化妆品中红霉素的高效液相色谱检测方法，.其特征在T样品预处理采用无水 甲醇或乙腈溶解萃取，超声提取15-25min， 0. 45pm滤膜过滤。
8.根据权利要求1所述的化妆品中红霉素的高效液相色谱检测方法，其特征在于样品分析后根据其保 留时间和光谱图进行定性分析，利用外标法根据其峰面积进行定量分析。
本发明是一种化妆品中红霉素的高效液相色谱检测方法，其特点在于采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C8柱或C18柱；采用紫外检测器或二极管阵列检测器在190-380nm处进行检测；以磷酸二氢铵溶液-乙腈缓冲液或磷酸二氢铵溶液-甲醇缓冲液为流动相；样品经无水甲醇或乙腈萃取，超声提取20min，再12000rpm/min离心约5min，取上清液作为供试样液，如有必要可再用0.45μm滤膜过滤备用；根据样品的保留时间和光谱图进行定性分析，根据其峰面积进行定量分析。该发明的优点在于分辨率、灵敏度高，重现性、选择性好，样品预处理方法简单快捷，适宜化妆品中红霉素的微量分析。
发明者郑伟东 申请人:广东省保化检测中心有限公司

nm）电磁波连续光谱作为光源照射样品，研究物质分子对光吸收的相对强度的方法。物质中的分子或基团，吸收了入射的紫外-可见光能量，电子间能级跃迁产生具有特征性的紫外-可见光谱，可用于确定化合物的结构和表征化合物的性质。紫外-可见吸收光谱在化学、材料、生物、医学、食品、环境等领域都有广泛的应用。

1. 紫外-可见吸收光谱法原理

物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子、原子等，吸收了入射光中某些特定波长的光能量，并相应地发生跃迁吸收的结果。紫外-可见吸收光谱就是物质中的分子或基团，吸收了入射的紫外可见光能量，产生了具有特征性的带状光谱。

1.1 分子光谱的产生以及类型

分子中有电子的运动，组成分子的各原子间的振动，以及分子作为整体的转动，这三种不同的运动状态都对应一定的能级。光和物质相互作用时，分子中电子能级、振动能级和转动能级产生变化，使分子对光产生了吸收、发射或散射，从而得到分子光谱。分子从外界吸收光能，从基态跃迁到激发态，把被吸收的辐射强度按波长顺序记录下来，便得到吸收光谱，如图2所示。

根据光辐射的波长范围和作用形式的不同，如图3所示，分子光谱包括紫外-可见光谱、红外光谱、微波谱、荧光光谱和拉曼光谱等。

1.2 紫外-可见吸收光谱的电子跃迁

有机化合物的紫外吸收光谱：基态有机化合物的价电子包括成键δ电子、成键π电子和非键电子n。分子的空轨道包括反键δ*和反键π*轨道。因此，可能得跃迁为δ→δ*、π→π*、n→δ*、n→π*等。由图4可见，各种跃迁所需能量大小为：δ→δ*＞n→δ*≥π→π*＞n→π*。

无机化合物的紫外吸收光谱：①电荷迁移跃迁：化合物中的电荷发生重新分布，导致电荷从化合物的一部分迁移至另一部分。②配位场跃迁：在配位的配位场作用下，产生d→d*和f→f*跃迁。当过渡金属离子与显色剂形成络合物时，既存在电荷转移吸收，又存在配位体吸收。

1.3 辐射吸收定律（朗伯-比耳定律）

如图5所示，当一束平行单色光照射溶液时，一部分光被溶液吸收，一部分被界面反射，其余光则透过溶液。我们把透射光强度(It)与入射光强度(Io)的比值It/Io称为透光度（Transmittance, T）。溶液对光的吸收程度常用吸光度（Absorbance, A）表示。吸光度A定义为透光度的负对数或透光度倒数的对数，即A=-lgT。

朗伯-比耳定律的物理意义是当一束平行单色光通过单一均匀的、非散射的吸光物质溶液时，溶液的吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。如果物质中只有一种吸光组分，则朗伯-比耳定律的数学表达式为A=K·C·L，吸收系数K与入射辐射的波长以及吸收物质的性质有光，K的单位为L/g·cm。若浓度的单位为mol/L，则K的单位为L/mol·cm，也称为摩尔吸收系数ε。

2. 紫外-可见分光光度计结构

分光光度法使用的仪器是分光光度计。分光光度计是由光源、分光系统（单色器）、吸收池、检测器和测量信号显示系统（记录装置）这五个基本部件组成的，如图6所示。由光源产生的复合光通过单色器分解为单色光，当单色光通过吸收池时，一部分光被样品吸收，未被吸收的光到达接收放大器，将光信号转变成电信号并加以放大，放大后的电信号再显示或记录下来。

光源：对光源的的基本要求是在广发的光谱区域内发射连续光谱；有足够的辐射强度；光源有良好的稳定性；辐射能量随波长没有明显的变化。在紫外及可见分光光度计上，常用的光源是钨丝灯和氢灯（氘灯）。钨丝灯受热造成钨蒸发损耗，可加入适量卤素或卤化物构成卤钨灯，延长使用寿命。

单色器：将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出任一波长单色光的光学系统。如图8所示，主要由狭缝、色散原件和透镜系统组成。

吸收池：又叫比色皿，如图9所示，用于盛放待测溶液和决定透光液层厚度的器件。主要由石英吸收池和玻璃吸收池两种。石英吸收池适用于紫外及可见光区，玻璃吸收池只能用于可见光区。

检测器：利用光电效应将透过吸收池的光信号转变为电信号。常用的有光电管、光电倍增管、光电二极管、光电摄像管等。

溶剂的选择：选择溶剂的一般原则是对试样有良好的溶解能力和选择性；测定在该波段溶剂本身无明显吸收；溶剂不与被测组分发生化学反应；被测组分在溶剂中具有良好的吸收峰形。尽量选用低极性溶剂，溶剂极性较高时物质的精细结构消失，只得到很宽的吸收峰。

比色皿的使用：透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，注意比色皿的配对使用，比色皿内的溶液以皿高的2/3至4/5为宜。

①把试样的光谱特征，如吸收峰的数目、位置、强度（摩尔吸收系数）以及吸收峰的形状（极大、极小和拐点），与纯化合物或者文献报道的标准紫外光谱图做比较，推测化合物的结构，检查化合物的纯度。

实例：沙特阿拉伯国王大学Mansour S. Al-Said等人[1]利用紫外-可见吸收光谱确定所制备的样品ALE-ZnONPs中含有氧化锌纳米颗粒。如图10所示，样品ALE-ZnONPs在375 nm出现了特征峰，制备样品的原材料ALE和ZnSO4在该处无特征峰。根据文献报道，纳米氧化锌的特征峰在358-375 nm之间，由此证实了氧化锌纳米颗粒的生成。

②根据吸收峰的强弱对比比较样品的相关性质。一种化合物可能拥有多个吸收峰，这些峰的相对强弱变化可以推测出化合物的相关性质。首先是根据文献了解化合物的每个吸收峰所代表的含义，再进行对比。

实例：以基于异靛蓝的聚合物P2-rn和P3-rn为例进行说明[2]。在这类基于异靛蓝的 D-A聚合物中，一般具有两个吸收带，band I和band II。band I又细分为0-0峰和0-1峰等，其中0-0峰表示分子的聚集状态，越高说明聚集越强。这两个聚合物结构的差异仅在其中一条烷基侧链的大小不同，P3-rn的烷基侧链比P3-rn的多出8个C原子。

从图11中紫外-可见吸收光谱图可以看出，从P2-rn到P3-rn，0-0峰的强度/0-1峰的强度减小，说明P3-rn在溶液中的聚集更弱，这和溶解性对比图所示相吻合，相同浓度下，P3-rn的溶解性明显较好，即分子更不易聚集，分散的更好。

根据吸收峰的强弱对比比较样品的浓度大小关系。

实例：四川大学的郭熠等人[3]利用紫外-可见吸收光谱对比了溶液中多硫化锂的含量，从而进一步对比了样品GSVm和GSm对多硫化锂的吸附能力的强弱。将样品GSVm和GSm分别放入相同浓度的多硫化锂溶液中，静置一段时间。样品吸附多硫化锂后，溶液中的多硫化锂浓度改变。如图12所示，测定吸附后溶液的紫外-可见吸收光谱，对比吸收峰的强弱，可以看出相较于原始的多硫化锂溶液，加入样品GSVm和GSm吸附后的多硫化锂溶液吸收峰强度均降低，并且加入样品GSVm吸附后的多硫化锂溶液吸收峰强度下降更多，说明样品GSVm吸附多硫化锂能力更强，使溶液中多硫化锂浓度下降更多。

单组分定量分析：①标准曲线法：直接分取标准溶液进行光度测定或显色测定所测得的吸光度与浓度作图得到的曲线（图13）。②标准加入法（增量法）：把未知试样溶液分成体积相同的若干份，除其中的一份不加入被测组分标准试样外，在其他几份中都分别加入不同量的标准试样，然后测定各份试液的吸光度，并绘制吸光度对增量的校正曲线（图14）。

多组分定量分析：在多组分体系中，如果各组分对光都有吸收并且无相互作用，这时体系的总吸光度则等于各个组分的吸光度加和，这就是光吸收的加和特性。解决多组分混合物中各个组分测定的基础是吸光度的加和性。对于一个含有多种吸光组分的溶液，在某一测定波长下，其总吸光度应为各个组分的吸光度之和。

示差分光光度法：普通分光光度测定在很低或者很高吸光度范围内进行定量分析时相对误差较大，因此不适于高含量或痕量物质的分析，可以采用示差分光光度法进行测定。示差分光光度是用一个已知浓度的标准溶液作为参比，与未知浓度的试样溶液比较，测量其吸光度。

实例：昆明医科大学的邓菊庆等人[4]采用紫外分光光度法测定了5种柑橘皮中总黄酮的含量。将样品溶液、芦丁标准液、空白对照液显色后在200～800nm波长进行扫描，选定最大吸收峰510 nm作为测定波长。于510 nm波长下测定不同浓度芦丁标准液的吸光度，以芦丁标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线（图16），进行线性回归。从线性相关方程计算出相应的黄酮浓度C，再换算成提取液中总黄酮的质量，从而计算出总黄酮含量。

3.5 原位紫外-可见吸收光谱法

通过原位紫外-可见吸收光谱图中吸收峰位置或者强度的变化可以分析样品在反应过程中的成分变化或者浓度变化。

实例：为了探究锂硫电池在放电过程中巯基与硫共聚物的反应机理，苏州大学的Na Xu等人[5]利用原位紫外-可见吸收光谱法测试了锂硫电池在第一次放电时硫化物成分的变化情况。图17A为测试装置示意图。首先制备了L2S、Li2S2、Li2S3、Li2S4、Li2S6、Li2S8溶液（溶剂为电解液），通过紫外-吸收光谱法得到了对应的吸收峰(图17D)作为参考。测定电池在放电过程中的紫外-可见吸收光谱，通过比对吸收峰的位置，确定了电极S-GSH（图17F）在放电过程中并未有长链多硫化锂（Li2S6、Li2S8）的产生。

3.6 误差分析：对朗伯-比耳定律的偏离

标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现标准曲线经常发生弯曲，这种现象称为对朗伯-比耳定律的偏离，如图18所示。

主要原因是目前仪器不能提供真正的单色光，实际上仪器所提供的入射光是由波长范围较窄的光带组成的复合光。由于物质对不同波长光的吸收程度不同，因此引起了偏离。

为克服非单色光引起的偏离，首先应选择较好的单色器，此外还应将入射波长选定在待测物质的最大吸收波长且吸收曲线较平坦处。另外，当溶液浓度较大时，吸光质点可能发生缔合等相互作用，影响对光的吸收。因此，朗伯-比耳定律只适用于稀溶液。

[3] 陈方正. 基于异靛蓝的给体-受体型共轭聚合物及其有机薄膜晶体管器件[D].天津大学,2018.

[4] 邓菊庆,柏春玲,杨学芳,胡月新,吴怡.紫外可见分光光度法测定不同品种柑橘皮中总黄酮含量[J].安徽农业科学,):210-211+252.