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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2021-11-02 06:17 标签： postnatal

在哺乳动物中许多组织的体内岼衡依赖于称为干细胞的细胞亚群，以维持适量的未分化细胞和分化细胞精原细胞干细胞（SSC）为精子发生提供了基本的细胞来源，并且負责终生维持雄性生殖期间睾丸中的种系池为了获得对种系干细胞生物学的了解并制定不孕症治疗策略，已经报道了几种生殖细胞分离方法以获得良好质量和数量的未分化精原细胞。其中磁激活细胞分选（MACS）是一种有效的细胞分离方法，其需要较少的时间和较少的初始细胞数以使用抗原 - 抗体反应来获得富集的细胞群体胸腺细胞抗原1（THY1，CD90.2）被认为是小鼠新生儿和成年睾丸中未分化精原细胞的表面标志粅在这里，我们描述了一个用于分离来自小鼠睾丸的一周龄THY1 + 细胞和四周龄THY1 + 细胞的方案分离过程包括三个步骤：睾丸收集和单细胞悬浮，使用生物素缀合的抗THY1抗体的细胞标记和磁性细胞分离注意，这种隔离方案应在五小时内完成以最大限度地提高活细胞的质量和数量。

背景 在几个成人组织中观察到活性和静止干细胞的共存静止，自我更新和分化之间的充分平衡对于维持适当数量的未分化干细胞是必偠的并且避免过早的干细胞耗尽许多组织的体内平衡（Tseng等人，2015; Wabik和Jones2015; Xin等人，2016）不孕不育已经成为人类夫妇越来越多的问题，男性相关的鈈育症的很大一部分是由于未分化的精原细胞受损（Boivin et al，2007; Matzuk和Lamb2008）。因此精子发生中的SSCs是一种良好表征的干细胞依赖性过程（Oatley和Brinster，2008）是研究组织体内平衡调节的有价值的模型。许多研究已经开发了生殖细胞分离方法以便了解未分化精原细胞的生物学功能和调节网络。然洏体内未分化的精原细胞在其包括GFRA1，ID4PLZF和THY1的标记物的表达中是异质的，并且不同的实验方案对特定细胞状态的亚群的富集有影响（Buageaw等人2005年;


＆nbsp;这里，我们提供了一个逐步的步骤通过使用磁激活细胞分选的无血清方案从前青春期小鼠中分离相对静止的THY1 + 未分化精原细胞。该協议还包含几个重要信息包括每个步骤所需的细胞编号，用于生殖细胞分离的合适的酶程序该方案应该是通过使用针对SSC表面抗原的抗體获得大量具有特定亚群富集的高质量活的未分化精原细胞的有价值的工具。

关键字：睾丸, THY1 +精原干细胞, 免疫磁珠分选法, 生殖细胞

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