PCR操作过程中有哪些注意事项(操作过程,加样顺序,试剂) - PCR实验 - 生物秀
标题: PCR操作过程中有哪些注意事项(操作过程,加样顺序,试剂)
摘要: [PCR操作过程中有哪些注意事项(操作过程,加样顺序,试剂)] 请问各位高手，在PCR操作过程中应注意哪些问题？譬如做混合管时的加样顺序，吸取试剂前是否要混匀离心之类的。谢谢！ 关键词:[操作过程 加样顺序 试剂]……
请问各位高手，在PCR操作过程中应注意哪些问题？譬如做混合管时的加样顺序，吸取试剂前是否要混匀离心之类的。谢谢！
回复注意事项对会者来说不难，但是对新手来说应该还是挺多的，简单说几条：1：避免交叉污染——勤换枪头和高压枪头和PCR管。2：引物设计要正确，选择可靠的生物公司合成引物，如果公司不好，给的引物会不出结果。据说上海生工不错。3：DNA提取要成功。4：引物和模板和体系所加的比例要合适，模板过量会抑制体系的反应。5：跑胶时注意区分开EB污染区和清洁区。6：吸取试剂前不必每次都混匀，离心是为了把粘在壁上和盖上的试剂离下来。不离也没关系，可以直接用枪头吸。但是配制的时候需要充分混匀，比如溶解引物，需要先混匀再分装。还有DNA提取之后最好4度过夜之后再做PCR，这有利于DNA的充分溶解。回复注意事项对会者来说不难，但是对新手来说应该还是挺多的，简单说几条：1：避免交叉污染——勤换枪头和高压枪头和PCR管。2：引物设计要正确，选择可靠的生物公司合成引物，如果公司不好，给的引物会不出结果。据说上海生工不错。3：DNA提取要成功。4：引物和模板和体系所加的比例要合适，模板过量会抑制体系的反应。5：跑胶时注意区分开EB污染区和清洁区。6：吸取试剂前不必每次都混匀，离心是为了把粘在壁上和盖上的试剂离下来。不离也没关系，可以直接用枪头吸。但是配制的时候需要充分混匀，比如溶解引物，需要先混匀再分装。还有DNA提取之后最好4度过夜之后再做PCR，这有利于DNA的充分溶解。谢谢，很有用。还想问下，如果枪头上有残留打不出来会有影响吗？如何避免这个问题啊？回复wjjagatha
还想问下，如果枪头上有残留打不出来会有影响吗？如何避免这个问题啊？如果枪头有残留，当然会影响结果。首先可以考虑换好一点的进口枪头。其次，可以在加样的时候将枪头恰好伸入PCR反应管的液面下一点，然后将液体缓缓打入液面下，至恰好打出一个小气泡为至。回复wjjagatha
还想问下，如果枪头上有残留打不出来会有影响吗？如何避免这个问题啊？如果枪头有残留，当然会影响结果。首先可以考虑换好一点的进口枪头。其次，可以在加样的时候将枪头恰好伸入PCR反应管的液面下一点，然后将液体缓缓打入液面下，至恰好打出一个小气泡为至。谢谢，估计换枪头是没有指望的，我试试看你后面教的方法吧！还想问下模板放4摄氏度冰箱可以放多久啊？回复如果配好的引物没有完全溶解，吸取稀释后会有影响吗？回复是融化吗？可能会有影响，一定要融化后再吸取稀释回复如果配好的引物没有完全溶解，吸取稀释后会有影响吗？我做过的许多次PCR中，不完全溶解是不影响结果的。不管是buffer还是taq还是引物，每次我都是看溶够了我用的量就开始吸。一来能有效保护产品的质量。二来节约时间。回复没试过不完全溶解到底行不行，每次我都害怕结果不好而全溶。回复用枪时候一定要按到底吗？我就不全是这样，比如加电泳样品的时候，全打出来反而把气泡也打出来了，只要刚好把样品全打进去即可。不同情况用枪习惯也不同，看情况而定。灵活。。。。。回复加样过程最好在冰块上操作。回复PCR做了很多，根据和自己的经验总结了一下几点，算是抛砖引玉吧，呵呵：1）PCR实验一定要保管好，防止交叉污染，尤其是ddH2O2的交叉使用，极易引起污染（惨痛的教训）！2)NA处理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上，所有缓冲液吸头、离心管等用前必须高压处理，常规消耗用品用后作一次性处理，避免反复使用造成污染。3)PCR在超净台内进行，操作前后紫外灯消毒。4)超净台内设内供PCR用微量离心机、一次性手套、整套移液器和其它必须品；移液品用一次性吸头和活塞的正向排液器，防止移液器基部污染。5)PCR操作应戴手套并勤于更换。5)成套，小量分装，专一保存，防止它用。配制试剂用新器具，用后作一次性处理。6)试剂管用前先瞬时离心（10s），使液体沉于管底，减少污染手套与加样器机会。7)最后加模板（包括在石蜡油后），马上盖好，混匀，瞬时离心（10s），使水相与有机相分开。加入模板且忌喷雾污染，所有非即用管都应盖严。加模板后应更换手套。8)引物稀释时，要首先瞬时离心，以避免粉末状引物在开盖时弹出管外。9)实验设阳性、阴性对照。回复“PCR在超净台内进行，操作前后紫外灯消毒”这一条估计还需具体问题具体分析，如果预防污染时可以考虑，如果做DNA的PCR、又没有污染之虞，这一步应该可以忽略。回复“PCR在超净台内进行，操作前后紫外灯消毒”这一条估计还需具体问题具体分析，如果预防污染时可以考虑，如果做DNA的PCR、又没有污染之虞，这一步应该可以忽略。对，时间长了，有一些步骤可以忽略，甚至简化，但是关键步骤是不能少的。回复酶有什么需要注意的吗？融化时间长会不会有影响？
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电话：021-达菲林打完后注意事项？达菲林在辅助生殖中的应用达菲林打完后注意事项？达菲林在辅助生殖中的应用宝宝的世界百家号达菲林作为促排卵常用的药物之一，被很多人关注，那么今天谈谈达菲林在试管婴儿中的应用。达菲林，通用名称：注射用醋酸曲普瑞林，英文名称：Triptorelin Acetate for Injection适应症：可诱导排卵（1）前列腺癌 治疗转移性前列腺癌。 对以前未接受过其它激素治疗的患者，药物效果更明显。（2）性早熟（女孩8岁以前，男孩10岁以前）（3）生殖器内外的子宫内膜异位症（I至IV期） 一个疗程应限制在6个月内。 （4）女性不孕症，在体外受精—胚胎移植程序（IVE-ET）中，与促进腺激素（hMG，FSH，hCG）联合使用，诱导排卵。（5）手术前子宫肌瘤的治疗 ，伴有贫血症（血红蛋白含量&=8g/dl）时。 为便于内窥镜手术和经阴道手术需缩小肿瘤大小时，疗程限于3个月。 如何使用：请严格按照程序进行复溶，达菲林仅可肌肉注射，用药盒内提供的溶剂复溶药物粉末，复溶后立即注射。复溶后得到的悬浮液不得与其它药品混合。注意：请严格按照程序进行复溶，任何误操作导致损失的药液量多于注射器中合理的残留量的情况应记录并报告。1.用粉红色针头把安瓿内溶剂吸出；　　2.把溶剂转注到瓶内，轻轻摇动；　　3.把全部液体吸出，不要翻转此瓶； 　　4.换针头后马上注射，不要久等。 　使用剂量一个疗程应至少4个月，每种适应症各有不同。子宫内膜异位症：应在月经周期的第1-5天开始治疗。一次1支，每4周注射一次。 根据发病时严重程度以及治疗过程中临床指标的变化（包括功能和器质性指标）而定。原则上，一个疗程应至少4个月，至多6个月。建议不要使用曲普瑞林或其他GnRH类似药物进行第二个疗程的治疗。 　女性不孕症：在月经周期第2天肌肉注射1支。当垂体脱敏后（血浆雌激素&50pg/ml），一般在注射本品后15天，开始联合使用促进腺激素治疗。 　手术前子宫肌瘤的治疗：治疗应在月经周期的前5天开始。每4周注射一次达菲林，每次1支，疗程3个月。 不良反应女性：治疗初期，由于血浆雌二醇水平一过性增高，出现子宫内膜异位症症状（盆腔痛、痛经）加重，1-2周后消失。第一次注射后一个月可能出现子宫出血。 该药物用于治疗女性不孕症时，联合使用促进腺激素可造成卵巢过度刺激，有可能出现卵巢肥大、盆腔痛和/或腹痛。治疗过程中，最常报导的不良反应如潮热、阴道干燥、性欲下降、性交困难与垂体-卵巢轴阻断有关。罕有头痛、关节痛和肌肉痛的报导。注意事项：女性：在医生给患者开药前，应确认患者没有怀孕。（1）女性不孕症：曲普瑞林与促性腺激素联合用药时，对于那些敏感的患者，会造成取卵数的显著增加，尤其是对于多囊卵巢综合征的患者。曲普瑞林与促性腺激素联合使用时，不同患者的卵巢对同一剂量的药物可能有不同的反应。对于某些病例，同一患者在不同的周期其卵巢反应也可能不同。注意事项：诱导排卵应在严格的、定期的生物检测和临床检查下进行，包括空腹血浆雌激素检查和超声检查。当卵巢反应过度时，建议停止注射促性腺激素，以终止刺激周期。 （2）子宫内膜异位症和手术前子宫肌瘤的治疗注意事项：每4周定期使用1支达菲林，通常引起低促性腺素性闭经。用药1个月后出现子宫出血属于异常；应核实血浆雌二醇水平，如果低于50pg/ml，需检查可能伴有的器质性病变。停止治疗后，卵巢功能恢复，最后一次注射后平均58天出现排卵，平均70天后出现第一次月经。在末次注射后的一个半月内应注意采取避孕措施。 常见问题答疑：打达菲林后食欲不好，吃饭时反胃想吐，这是正常现象吗？答：一般肌注达菲林后会有部分病人出现胃部不适，无需特殊处理，如果加重请到门诊就诊，如果减轻可以观察。Ca125值30多，已经打了3针达菲林，就是降不下来，怎么办？答：有些深部的内异病灶因为周围的粘连包裹严重，影响药物的疗效，可以改打达必佳试试或停药，具体可以和主治医师商讨后定下一步方案。请问雌二醇得达到多少才能促排呢？打过达菲林的。答：在肌注达菲林后体内呈现低雌状态，随着时间的推移，雌激素水平逐渐上升，一般雌二醇需要达到150pmol/l才可以促排卵。达菲林第一针是可以在月经周期第几天注射？答：达菲林第一针可以在黄体期（下次月经来潮前2周内）或月经来潮的第2天之前都可以用药。友情提醒：准备打针当月需要避孕。本文仅代表作者观点，不代表百度立场。系作者授权百家号发表，未经许可不得转载。宝宝的世界百家号最近更新：简介:分享爱与生育知识帮助人民成为更好的父母作者最新文章相关文章王宝江& （天津市蓟县人民医院药剂科& 天津蓟县301900）
【中图分类号】R156.3【文献标识码】B【文章编号】11)12-0160-02
&&&&&&& 奥美拉唑是具有脂溶性的质子泵(H＋-K＋-ATP酶)抑制剂，呈弱碱性，易浓集于酸性环境中，能特异性地作用于胃壁细胞质子泵所在部位，并转化为亚磺酰胺的活性形式，然后通过二硫键与质子泵的巯基结合，从而抑制该酶的活性，使胃液中的胃酸大大减少。主要用于治疗胃及十二指肠溃疡、反流性食管炎、卓-艾综合征、消化性溃疡急性出血、急性胃黏膜病变出血等疾病，临床使用广泛。但奥美拉唑在使用过程中存在较多配伍禁忌及严重不良反应，应该引起临床重视。笔者通过文献分析，综合奥美拉唑在在使用过程中存在的问题，为临床合理使用奥美拉唑提供参考，以避免和减少不良反应（ADR）的发生。
&&&&&&& 1 奥美拉唑溶液配制过程中存在的问题
　　奥美拉唑具有磺酰基苯并咪唑化学结构，稳定性易受溶液pH值、光线、金属离子、温度等多种因素的影响，特别是在酸性条件时，奥美拉唑化学结构易发生变化，出现聚合和变色现象［1］。临床实际应用时，常因操作不当，配置溶液出现变色现象，造成药液的浪费。在配制药液时，由于奥美拉唑钠注射用灭菌粉末小瓶的气体压力随着专用溶媒的进入而逐步增加，从而不易将10ml专用溶媒全部推入小瓶内，造成注射器内留有部分的溶媒，并且小瓶内的药液又会部分回渗到注射器中，最终致使注射器内的药液产生变色。这与临床操作者对奥美拉唑钠药物性质了解不够，操作不规范密切相关［2］。黄正安等［3］研究发现，pH值是奥美拉唑溶液不稳定的主要因素。奥美拉唑专用溶媒属于缓冲溶液的性质，用奥美拉唑专用溶媒配好的溶液与适宜的输液混合时，不会造成pH值的急剧改变，溶液就不会变色。同时指出，配置所使用的注射器与输液器应单独使用，不宜接触其他药液；输液应现用现配，配置好的药液应在2 h内用完；静脉滴注时间应在20～30min之间，若滴注时间过长，药液易受光线、温度的影响而变色，故整个滴注过程中应注意避光。
&&&&&&& 2 时辰给药的问题
　　奥美拉唑通过抑制胃壁细胞H＋-K＋-ATP酶阻断胃酸分泌过程，产生极明显的抑制胃酸分泌作用，并呈剂量依赖性。胃酸分泌越多，对奥美拉唑的吸收也越有利，更利于药物迅速沉积于壁细胞内，发挥很强的抑制胃酸分泌作用。有研究显示［4］，早餐前半小时服用奥美拉唑效果最佳。因为进食后胃壁细胞内有大量&活性泵&与奥美拉唑吸收峰相平行，抑酸作用最强。同时，依据人体胃液分泌规律（夜间多于白天）睡前加服20 mg奥美拉唑，可充分发挥其强大的抑制胃酸分泌作用，使胃酸分泌大大减少，更利于胃肠黏膜组织的修复及溃疡的愈合。奥美拉唑的时辰用药可以减少用药剂量和给药次数。符合人体生理规律是合理用药的一项重要选择，既可达到患者的治疗需要，又可尽可能的减少ADR的发生［5］。
&&&&&&& 3 奥美拉唑联合应用时的问题
　　奥美拉唑对肝药酶P-450有抑制作用，可延长地西泮、苯妥英钠、氨基比林等的清除。李旭梅等［6］建议奥美拉唑注射液应单独使用。临床医师在联用奥美拉唑与其他药物治疗疾病时，尤其是注射液，应对其相互作用充分了解，并详细询问患者用药史，避免出现不合理的联合用药。但奥美拉唑与阿莫西林或其他抗生素合用，可杀灭幽门螺杆菌（HP）。陈国儒等［7］报道口服奥美拉唑、克拉霉素和替硝唑，用于HP，连用7天，HP的根除率为89.2%。
&&&&&&& 4 剂型给药的问题
　　奥美拉唑给药途径有静脉和胃肠道给药2种。其耐受性良好，ADR多为轻度和可逆，主要涉及消化、神经、泌尿、心血管、内分泌系统及皮肤等。但两种给药途径均有严重的ADR。静脉途径给药起效快，ADR的发生较早且迅速，有的用药几分钟即可能引起过敏性休克。因此，在静脉给药时应密切关注患者过敏反应的发生。由于注射用奥美拉唑钠存在较多配伍禁忌及严重ADR，在选择用药途径时应慎重考虑，注意严格控制给药剂量，尽量选择较安全的口服制剂。
　　奥美拉唑的ADR可发生于用药的全过程，口服和静脉给药均可发生。从ADR发生的时间来看，口服给药的ADR集中发生在3d～2周的时间内，而注射给药发生在10min以内（以3～5min为多）及3d后。
口服给药数日后，可引起造血系统、神经系统的损害以及代谢紊乱，因此用药开始的1周内应加强监测ADR，尤其要预防对患者视神经等引起不可逆的严重损害［8］。
&&&&&&& 5 长期应用过程中存在的问题
　　长期服用奥美拉唑可引起胃内细菌过度生长，菌群发生明显变化，细菌总数增加，亚硝酸盐和N-亚硝酸盐均明显增高，血浆胃泌素水平升高。胃泌素有致癌的作用，诱导胃癌发生率增加［9］。其机制是奥美拉唑高度抑制胃酸分泌，胃泌素细胞分泌胃泌素的反馈抑制作用被消除，从而导致血浆胃泌素水平升高［5］。因此，奥美拉唑应限用于H2受体拮抗药疗效不好的患者，且疗程不应过长（一般4～8周）。建议长期服用奥美拉唑的患者定期做胃镜检查，并给予维生素C或维生素E以抑制亚硝酸盐的形成，避免胃内细菌过度滋生，可有效防止胃嗜铬细胞增生和类癌的发生。
　　奥美拉唑主要在肝脏代谢，80％以代谢产物的形式从肾脏排泄，其余由粪便排泄。长期应用可使血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）与天冬氨酸氨基转移酶（AST）和胆红素都有暂时性升高，上述酶类可增加致癌因子的生物活性和某些药物对肝脏的毒性作用［10］。黄凯伟报道［11］患者服用奥美拉唑后致ALT、AST升高，出现肝损害；亦有报道［12］患者服用奥美拉唑后引起间质性肾炎、急性尿潴留及血尿等，因而肝、肾功能不全者和老年人用药时应特别慎重，注意观察ADR，必要时减少剂量或改用其他药物。
　　张建华［13］等调查117例使用奥美拉唑的患者发现，用药7d内白细胞计数平均降低24%，有10.3%的患者出现白细胞计数降至4.0&109个&L-1以下。长期或大量使用应用奥美拉唑时应定期检查血常规，遇到不明原因的白细胞减少时应考虑可能为该药所引起，要及时停药并作相应的对症治疗，以免造成严重的粒细胞缺乏症。
　　此外，长期服用亦可引起维生素B12的缺乏。维生素B12缺乏可以导致S－腺苷蛋氨酸和蛋氨酸的合成障碍，这很可能是神经系统病变的原因之一。这种影响与奥美拉唑剂量有关，剂量越大，影响越大。
　　综上所述，奥美拉唑在使用过程中，要注意：⑴操作者在药液配制前要仔细阅读药物使用说明书，避免药液变色；⑵早餐前半小时服用奥美拉唑最佳；⑶尽量选择较安全的口服制剂；⑷长期服用奥美拉唑的患者定期做胃镜检查，并给予维生素C或维生素E，定期检查血常规，肝、肾功能，尤其是肝、肾功能不全者和老年患者。
　　随着奥美拉唑的临床应用日益广泛，不良反应越来越多，其合理应用变得越来越重要，这就需要广大临床工作者在应用奥美拉唑时，要严格掌握其适应症，注意可能发生的问题，减少药害事件的发生，从而达到合理应用奥美拉唑的目的。
［1］朱乐亭,韩 容,赵志刚. 奥美拉唑注射剂使用过程中变色原因及对策［J］.中国药房,):800.
［2］ 陈清,卢秀华,薛占英,等.pH值及温度对注射用奥美拉唑钠溶液质量的影响［J］.中国药业,:23.
［3］黄正安,马靖.注射用奥美拉唑合理配备应用探讨［J］.右江医学,):210.
［4］ Richardson P, Hawkey C J. Stack W A. Proton pump inhibitors. Pharmacology and rational for use in gastrointestinal disorders［J］.Drug,):307.
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［6］ 李旭梅,涂厉标.奥美拉唑的的化学配伍禁忌及药物相互作用［J］.中国临床药学杂志,):320.
［7］ 陈国儒,阮建新,袁 林.3种治疗方案治疗幽门螺杆菌感染的成本-效果分析［J］.中国药房,):84.
［8］ 项迎春,徐旭东.奥美拉唑致不良反应96例文献分析［J］.中国药房,)863.
［9］ 王 萍. 奥美拉唑的不良反应［J］.海峡药学,):198.
［10］ 骆泽宇.奥美拉唑的临床合理应用及不良反应［J］.现代中西医结合杂志,):3314.
［11］ 黄凯伟.奥美拉唑不良反应分析［J］.现代医院,):64.
［12］ 张晓东,方敬爱,武明虎.奥美拉唑致间质性肾炎的临床分析［J］. 中国中西医结合肾病杂志,):543.
［13］ 张建华,齐晓涟.注射用奥美拉唑致血液系统不良反应的调查分析［J］.药物不良反应,):684.
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& 描图纸这种办公用品在使用时需要注意哪些问题?
描图纸这种办公用品在使用时需要注意哪些问题?百欣小编 /
　　描图纸也是一种比较常见的办公用品，它是半透明纸张，可以用来晒制设计图的蓝图。决定一张描图纸质量好坏的因素有两个：一是描图纸的透明度。二是描图纸的纯净度。描图纸是因为含有一定比例的水分才会表现为半透明状态。因此，在使用或是保存描图纸时需要特别注意一些问题。
　　1，在使用描图纸之前，要进行防静电处理。可以将描图纸用手拿起，反复的上下抖动，这样可以避免细小杂物的吸附，而影响使用效果。
　　2，注意区分描图纸的上下面。使用描图纸时应该是正面朝上的，也就是比较光滑的那一面才是描图纸的正面。这点比较难以注意到，需要使用者特别留心。
　　3，描图纸在不使用的时候要尽量保存在恒温的环境下，并且最好是密封状态。这样能够防止描图纸变得干脆，或是受潮从而变质，不能使用!
　　另外，小编还要为大家讲解一下描图纸的用法，把需要描摹的原件放在平整的桌子上。再把描图纸正面朝上，平铺在原件上。可以用胶带固定好描图纸，防止在绘图时描图纸发生挪动。然后按照原件上的图案开始描图。图案描完之后，把正面铺在橡皮上。用硬币之类的硬物轻轻的刮，就能使描图纸上的图案复印到橡皮上。是不是很神奇?
　　以上就是百欣办公用品商城小编为大家讲解的办公用品描图纸使用时需要注意的一些小问题。希望大家在使用描图纸时千万要注意这些小细节，以免前功尽弃。南方财富网声明：资讯来源于合作媒体及机构，属作者个人观点，仅供投资者参考，并不构成投资建议。投资者据此操作，风险自担。
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