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共有&6&人回复了该问答新手请教鲁米诺化学发光的问题
请教下各位大虾关于化学发光的问题我在优化鲁米诺+双氧水+催化剂的体系时发现数据很难重复，而且平行数据之间的差别很大，本底很高，用的是beckman的酶标仪测定的，各位大虾有什么 意见或者建议么？
快速回复【花三五分钟，帮别人解决一个问题，快乐自己一天！】
回复于： 22:28:42
不太懂酶标仪，鲁米诺-过氧化氢-催化剂，需要先选择好条件，然后再进行定量测定，这样重复性会好。
回复于： 11:44:30
鲁米诺配好后最好放置两天信号比较稳定，鲁米诺过氧化氢是很成熟的体系，你可以先优化鲁米诺的浓度及pH，然后优化过氧化氢，催化剂最后优化就可以
回复于： 0:05:18
鲁米诺没有用过，但这个重现性不好的现象对于化学发光来说非常正常。流动注射-化学发光似乎会好些。
回复于： 15:18:32
3V仪器，厂家直销，为您提供专业ROHS、卤素、XRF、元素分析仪、荧光光谱仪、REACH相关的检测仪器和检测服务，检测铅/镉/汞/溴/铬/卤素等有害元素，针对ROHS环保检测仪器的保养和维修，二手仪器销售/租用，价格公道。咨询热线：/汪经理 & 期待与您合作。国内最专业做ROHS、卤素检测仪器的厂家-3V仪器 如有关于ROHS检测的需求，和关于ROHS技术方面的问题，可以和我交流，很高兴为您服务。
回复于： 14:45:03
鲁米诺+双氧水+催化剂 这个肉眼不可见的啊，你用的多少的波长测定的？
回复于： 16:06:02
酶标仪化学发光反应的发光类型通常分为闪光型和辉光型两种，闪光型发光时间很短，只有零点几秒到几秒。辉光型发光时间从几分钟到几十分钟，或几小时至更久。闪光型的样品必须立即测量，必须配以全自动化的加样及测量酶标仪。单纯的鲁米诺过氧化氢发光时间比较长，如果你加入催化剂后发光时间很短的话，有可能是因为测量不及时造成的
未解决问题郝巧艳1& 王金中2
　　1.延安职业技术学院& 陕西延安& 716000；
　　2.河南大学& 河南开封& 475004
　　【摘& 要】目的：建立一种测定头孢他啶的新方法。方法：碱性条件下，鲁米诺-过氧化氢有一定的化学发光，纳米银能增强体系的发光强度，而头孢他啶对该体系有明显的催化作用，利用此现象测定头孢他啶，其含量在5.0&10-8-3.0&10-5 g/mL内与△I有线性关系。结果：该法测定头孢他啶的线性范围为5.0&10-8-3.0&10-5 g/mL，检出限为2.0&10-8 g/mL，RSD为1.68％，结论：将其用于药物制剂中头孢他啶含量的测定，结果令人满意。
　　【关键词】鲁米诺；纳米银；头孢他啶；化学发光
　　【中图分类号】O657.31&&& 【文献标识码】A&&& 【文章编号】（2-02
　　Determination of Ceftazidime by Luminol-Hydrogen peroxide
　　-Silver Chemiluminescence System
　　HAO Qiao-yan，WANG Jin-Zhong
　　(Yan'an Vocational and Technical Institute, Yan'an Shaanxi 716000)
　　(College of Chemistry and Chemical Engineering, Henan University, Kaifeng 475004)
　　【ABSTRACT】OBJECTIVE& To establish a method to determine ceftazidime. METHODS 　 In alkaline medium, silver nanoparticle could ehance the chemiluminescence (CL) of the luminol- hydrogen peroxide system ,and ceftazidime could catalyze CL of this system. A new method for determination of ceftazidime was established. RESULTS& The relative standard deviation (RSD) was 1.68% and the linear range was 5.0&10-8-3.0&10-5 g/mL..CONCLUSION　 It has been satisfactorily applied to determine ceftazidime in injection.
　　【Keywords】L S C Chemiluminescence
　　头孢他啶(Ceftazidime)属第三代头孢类抗生素，抗菌活力强，抗菌谱广，对革兰阳性或阴性菌均具有较强作用，是一类重要的&内酰胺类抗生素。目前国内外测定头孢他啶的含量的有高效液相色谱法[1-3]、毛细管区带电泳法[4]、分光光度法[5]、单扫描示波极谱法[6]，荧光光度法[7]。将纳米银应用于鲁米诺-过氧化氢发光体系，显著增强了该体系的发光强度，而利用此现象来测定头孢他啶的含量未见报道。本实验利用此现象建立了流动注射化学发光法测定头孢他啶的新方法。
　　1 实验部分
　　1.1 仪器与试剂
　　IFFM&E型流动注射化学发光分析仪（西安瑞迈电子有限公司）； 970CRT荧光分光光度计。头孢他啶对照品（齐鲁制药有限公司）；鲁米诺（陕西师范大学分析科学研究所)）；H2O2；氢氧化钠；柠檬酸钠。
　　1.2 实验方法
　　1.2.1 纳米银的合成
　　据文献[8]的方法，20 nm银的合成：将50 mL 1. 0 &10-3 mol /L 硝酸银逐滴加入搅拌的150 mL 2.0&10-3 mol /L 硼氢化钠中，20 min后，再加入10 mL 质量分数为1% 柠檬酸钠溶液作为稳定剂，继续高速搅拌30min 后将得到银溶胶，将其冷藏在4 ℃冰箱中，储存48h 后便可使用。
　　1.2.2 测定方法
　　流动注射化学发光法的流程如图1所示，分别将H2O2、碱性鲁米诺溶液、纳米银溶胶或纳米银溶胶+头孢他啶混合溶液输入相应的管道。记录样品信号（I），空白信号（I0），增加值用△I表示（△I=I-I0），用△I进行定量分析。
　　Fig.1 Schematic diagram of FIA chemiluminescence analysis
　　a:纳米银或纳米银+头孢他啶(silver nanoparticle or silver nanoparticle + ceftazidime) b:鲁米诺(luminol) c:过氧化氢(H2O2)& P1，P2:蠕动泵(peristaltic pump)& V:进样阀(sampling valve)& F:流通池(flow cell)& W:废液(waste)& PC:计算机(computer)& PMT:光电倍增管(photomultiplier tube)& NHV:负高压(negative high voltage)&
　　2 结果与讨论
　　2.1 测定条件优化
　　2.1.1 反应介质的影响
　　试验了NaOH、Na2CO3、NaHCO3溶液对体系发光强度的影响，我们发现在0.10 mol/L NaOH溶液中发光强度较大且相对稳定，所以我们在0.10 mol/L NaOH溶液中进行试验。
　　2.1.2 过氧化氢浓度的影响
　　H2O2是氧化剂，其浓度直接影响体系的发光强度。在5.0&10-5 mol/L～1.0&10-2mol /L内试验了不同浓度H2O2对&DI 的影响，我们发现，&DI 随H2O2浓度的增大而增大，当H2O2浓度超过1.0&10-3 mol /L 时，&DI 开始减小，所以选择H2O2为1.0&10-3 mol /L。
　　2.1.3鲁米诺浓度的影响
　　试验了1.0&10-6-5.0&10-4 mol/L内鲁米诺浓度对发光强度的影响。发现随着鲁米诺浓度的增大，△I增大，当其为2.0&10-4 mol/L时，△I最大；继续增加鲁米诺的浓度，△I反而降低。因此选择鲁米诺为2.0&10-4mol/L。
　　2.1.4纳米银的影响
　　试验了纳米银浓度对体系发光强度的影响，发现纳米银在1.2&10-5&5.0&10-5 mol/L内发光强度随浓度增大而增强，当其超过4.0&10-5 mol/L时，△I开始下降。于是选择纳米银为4.0&10-5 mol/L。
　　2.2实验结果
　　在优化条件下，测得头孢他啶的在5.0&10-8-3.0&10-5& g/mL范围内与△I呈现良好线性关系。其回归方程△I=55(R= 0.9982，RSD=1.68%)，检出限为2.0&10-8 g/mL。
　　2.3 样品测定
　　称适量头孢他啶粉状针剂（市售）样品，处理后在优化条件下测定发光强度，代入线性回归方程计算头孢他啶含量，得出其平均含量为标示量（1.0 g）的98.4%（n=6），与药典法测定结果（99.1%）无显著性差异。同时回收率测定结果见表1。
　　2.4反应机理探讨
　　Luminol-H2O2 体系本身有一定的化学发光，当加入纳米银后发光强度显著增大。用荧光仪扫描了Luminol-H2O2 和 Luminol- H2O2 - Ag-两个体系的发射光谱，发现他们的最高峰均在425 nm左右，这与3-氨基邻苯二甲酸根离子的最大发射波长一致，说明该体系的发光体仍然是激发态的3-氨基邻苯二甲酸根离子，于是推断纳米银只起催化作用。
　　3 结论
　　在体系中加入纳米银后测定头孢他啶，提高了头孢他啶的灵敏度。于是建立了流动注射化学发光测定头孢他啶的新方法。对市售样品进行了测定，与标示量基本一致，结果满意。
　　参考文献：
　　[1]国家药典委员会，中华人民共和国药典（二部）［Ｓ］．北京：中国医药科技出版社，.
　　[2]张迹镅┢妫龋龋校蹋貌舛ㄗ⑸溆猛锋咚ぶ械挠泄匚镏剩郏剩荩泄股卦又荆）：752-755.
　　[3]张冬，刘俊娇，张会兰等．注射用头孢他啶中头孢他啶与精氨酸的ＨＰＬＣ法测定［Ｊ］．中国医药工业杂志，）：125-127. [4]　
　　[4]李捷伟，柴逸峰，刘长海，等．毛细管区带电泳法测定头孢他啶粉针剂的含量［Ｊ］．西北药学杂志，）：99-100．
　　[5]孙瑶，吴呈珂，李全民．硝普钠分光光度法测定头孢他啶［Ｊ］．应用化学，）：．
　　[6]李艳霞，王运生，刘波．单扫描示波极谱法测定针剂中头孢他啶含量［Ｊ］．理化检验－化学分册，）：21-24．
　　[7]王崇妍，李永强，张远馥，等．荧光分光光度法测定注射用头孢他啶的含量［Ｊ］．河南大学学报（医学版），）：48-50．
　　[8] Guo J Z，Cui H，Zhou W， et al． Ag Nanoparticle-catalyzed Chemiluminescent Ｒeaction Between Luminol and Hydrogen Peroxide［J］． J Photochem Photobiol A， 2008， 193( 2 /3) : 89-92．
　　基金项目：
　　河南省教育厅自然科学基金资助项目（）
　　作者简介：
　　郝巧艳，女，(1982-)，延安职业技术学院化工系教师，理学硕士，研究方向：分析化学
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